超声波提取木瓜叶总黄酮

超声波提取木瓜叶总黄酮

作者：佚名    科研信息来源：本站原创    点击数： 336    更新时间：2006-11-14

[关键词]：超声波提取,木瓜叶,抗肝炎,腰椎增生性关节炎,黄酮类

健康网讯：

    木瓜为蔷薇科木瓜属植物，用途广泛，集观赏、食用、药用于一体。木瓜在我国分布广泛，医学名著《本草纲目》《本草遗拾》等对木瓜的舒筋活络、解渴生津、平肝和胃、去风湿、治霍乱等功效都有详尽的记载。木瓜具有抗肝炎作用，用于治疗腰椎增生性关节炎、前列腺增生、术后疼痛及痹证等症状。近年来的研究表明，木瓜果实中除含有氨基酸、维生素、果胶、有机酸、矿物质等营养物质外，还含有具有生物活性的黄酮类物质。

    有文献报道木瓜中总黄酮的提取方法采用乙醇提取，但是，这种方法的提取效率仍然较低。近年来，超声技术应用于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等研究已有报道，表明其具有耗能低、效率高、不破坏有效成分的特点。很多研究表明，利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，可加速植物材料中的有效成分进入溶剂，从而增加有效成分的提取率，缩短提取时间，并且还可避免高温对提取成分的影响。但超声技术应用于提取木瓜叶中黄酮类物质的研究尚未见报道，本文报道用超声波提取木瓜叶总黄酮及鉴别。

    1　仪器与试剂

    1.1　仪器　KQ5200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；UV-755B紫外可见分光光度计（上海分析仪器总厂）； ZF-Ⅰ型三用紫外分析仪（上海顾村光电仪器厂）；SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）。

    1.2　试剂　95%乙醇AR; 60%乙醇AR；亚硝酸钠AR;硝酸铝 AR；氢氧化钠AR;正丁醇AR；三氯化铝AR;盐酸AR;氨水AR;镁粉AR;乙酸镁AR;冰醋酸AR;乙酸乙酷AR;芦丁标准品（中国药品生物制品检定所）；新鲜木瓜叶采自右江民族医学院校园内。

    2　方法与结果

    2.1　总黄酮成分提取　取新鲜木瓜叶，烘干，粉碎。称取木瓜叶粉末约6g，加80 ml95 %乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤。滤渣再加80 ml95％乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤，合并两次滤液，减压回收乙醇至滤液仅剩5～7 ml为止，放置100ml容量瓶中，用 60%乙醇稀释至刻度，得样品液。

    2.2　测定方法依据　以芦丁为对照品测定木瓜叶中总黄酮的含量，加人铝离子试剂，同时控制适宜pH值，使黄酮化合物与铝盐形成络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。

    2.3　定量实验-总黄用的含量测定

    2.3.1　波长的选择　取样品液适量，在0.30 ml5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在420 700 nm波长范围测定络合物的吸光度，络合物于510 nm波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。

    2.3.2　标准曲线的绘制　分别精密吸取芦丁对照液（0.10 mg/ ml)0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00ml于10.00 ml容量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.30 ml,摇匀，静置6 min;再加 10%硝酸铝溶液0.30 ml，摇匀，静置6 min;再加4%氢氧化钠溶液4.00 ml，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置12 min，以试剂作空白参比液，于510 nm处测定吸光度，结果见表1。

表1　紫外可见分光光度计测定芦丁对照液吸光度
————————————
  C/mg·ml-1　 吸光度
————————————
     0.00　    0.000
     0.005　   0.038
     0.01　    0.076
     0.02　    0.159
     0.03　    0.245
     0.04　    0.330
     0.05　    0.415
————————————

    根据上表得回归方程：A＝-6.967 1×10^-3＋8.418 1C,r =0.999 9

    2.3.3　提取物含量的测定　精密吸取样品液0.50 ml,置10.00 ml 容量瓶，按标准曲线的制备方法测定其吸光度A＝0.409，根据回归方程：A＝-6.967 1×10^-3+8.418 1C，计算样品中总黄酮的含量C=0.988 0 mg/ml。

    2.3.4　回收实验　精密量取样品液1.00 ml，加入标准芦丁对照品 1.00 ml(0.10 mg/ml），同前样品测定方法操作测定吸光度，求出回收率为97.79%。

    2.4　定性实脸-总黄酮的鉴别

    2.4.1　颜色反应　紫外光下呈色反应：取该样品溶液点在滤纸上，在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点。

    浓氨水反应：取该样品溶液点在滤纸上，将滤纸在氨水上方熏0.5 min，立即在紫外光下观察，呈极明显的黄褐色荧光斑点。

    三氯化铝反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1%三氯化铝乙醇溶液，吹干。在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈黄色荧光斑点。

    乙酸镁反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1%乙酸镁甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黄色斑点。

    盐酸-镁粉反应：取乙醇提取液1ml于试管中加镁粉，再加入浓盐酸数滴（1次加入），在泡沫处呈紫红色。

    2.4.2　纸层析　取样品溶液10μl点在滤纸上。用正丁醇，醋酸 :水=4:1:5（体积比）为展开剂，上行展开5 h,取出晾干。喷 1%氯化铝乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可见荧光斑点。

    3　讨论

    3.1　实验结果表明，本实验方法工艺简单，回收率为97.79%，利用本文所提供的超声波提取、纯化方法而得到的黄酮类物质其纯度较高。超声波可以强化乙醇浸提法，达到省时、高效、节能的目的，此方法采用全物理过程，无任何污染，是一条理想的提取黄酮类物质的途径，具有广阔的应用前景。

    3.2　黄酮类化合物是一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分。在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇，其它包括双氢黄（醇）、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色昔及新黄酮类等。天然来源的生物黄酮分子量小，能被人体迅速吸收，能通过血脑屏障，能进入脂肪组织，进而体现出如下功能:消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大脑及其他脏器细胞的功能。

    黄酮类化合物具有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用。近年来，世界上掀起了植物药开发的热潮，植物药以其天然低毒的特点倍受青睐，而黄酮类化合物以其广谱的药理作用引人瞩目，木瓜叶分布广泛，本文实验结果表明，木瓜叶中含有较为丰富的黄酮。因此，木瓜叶具有广泛开发和利用价值，值得综合利用加强资源开发。