western-blot常见问题及解决对策

常见问题	解决对策
两块玻璃板之间灌胶，胶总是不平	玻璃没有洗干净，应该洗得很干净
	过硫酸铵和TEMED加量相对较多
	加完试剂后应摇匀
总是漏胶	避免玻璃边缘（与胶条接触处）破损
	将两块玻璃板摆放对齐，底部处于同一平面
膜上有明显气泡	操作时将气泡完全排除
	靠膜一侧的滤纸应铺平
特异性低	优化一抗
	提高一抗和二抗的稀释度
	降低SDS-PAGE中蛋白的上样量
背景高	优化封闭液
	优化洗涤缓冲液，增加洗涤次数
	减少曝光时间
信号低	优化一抗
	浓缩样品
	选择更高灵敏度的发光液，如enlight等。