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前言 标准目前未收载栀子苷含量测定方法,为了更好控制药品质量,我们采用高效液相色谱(HPLC)法测定该制剂中的栀子苷含量,实验结果表明,该方法分离度高、重复性好,获得了满意的结果。 1 仪器与试药 APSH-6000型高效液相色谱仪，色谱工作站, APS-C 18 色谱柱(250 mm×4.0 mm,5 μm)；超声波处理仪。栀子苷对照品(中国药品生物制品检定所提供,批号110749-200613)；清开灵胶囊样品(广州白云山明兴制药有限公司,批号 Mk2901、Mk2902、Mk2903)。乙腈、甲醇为色谱纯。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱为APS-C 18 (250 mm×4.0 mm,5 μm),流动相为乙腈-水(15∶85),检测波长为 238 nm,流速为 1.0 mL/min,进样量 10 μL [1] 。 2.2 供试溶液的制备 2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取栀子苷对照品 15.1 mg,置 50 mL 棕色量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,精密量取 5 mL,置100 mL 量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,制成每 1 mL 含 15.1 μg的溶液,即得。 2.2.2 供试品溶液的制备 取本品 10 粒,除去胶囊壳,内容物精密称定,研细,取粉末 0.25 g,精密称定,置 25 mL 量瓶中,加甲醇 20 mL,超声处理(功率 300 W,频率 33 kHz)30 min,放冷,加甲醇稀释至刻度,摇匀,微孔滤膜(0.45 μm)滤过,即得。 2.2.3 阴性样品溶液的制备 按处方组成,取除栀子外的其余药味,按工艺要求制成不含栀子苷的清开灵胶囊,再按供试品溶液的制备方法操作,得阴性样品溶液。 2.3 空白试验 按上述仪器和实验条件,取 Mk2901 批供试品溶液、阴性样品溶液、栀子苷对照品溶液分别注入液相色谱仪,测定。结果供试品色谱图中,呈现与对照品保留时间相同的色谱峰,且基线平稳,分离度好,阴性样品在此保留时间无色谱峰(见图 1)。 2.4 线性关系 分别精密吸取浓度为 0.302 mg/mL 对照品溶液 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL 至 10 mL 容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,分别吸取 10 μL 注入液相色谱仪,测得峰面积。以峰面积为纵坐 标,栀子苷对照品进样量(μg)为横坐标,绘制标准曲线,计算回归方程： Y ＝1 351.973 X －4.454, r ＝0.999 8,在 0.060 4～0.302 0 μg范围内,对照品进样量与峰面积呈良好的线性关系。 2.5 精密度试验 取 Mk2901 批供试品溶液,按上述色谱条件重复进样 6 次,测定峰面积,计算其 RSD＝0.83%。结果表明仪器精密度良好。 2.6 稳定性试验 取 Mk2901 批供试品溶液,按上述色谱条件分别于 0、2、4、6、8、12 h 测定峰面积,计算其 RSD＝0.86%。结果表明样品在10 h 内稳定。 2.7 重复性试验 取本品内容物(批号 Mk2901)10 g,混合均匀,精密称取样品 5 份,每份 0.25 g。按供试品溶液制备方法制备,依上述测定条件测定,并计算含量,结果平均含量为 1.602 4 mg/g,RSD＝1.22%。表明本法重复性好。 2.8 加样回收率试验 精密量取重复性试验项下的样品 0.1 g 各 5 份,分别精密加入浓度为 302 μg/mL 的栀子苷对照品溶液 0.5 mL,按供试品溶液制备方法处理得供试品溶液,按上述色谱条件测定,计算回收率,结果表明此色谱条件测定栀子苷含量回收率良好。见表1。 2.9 样品测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液 10 μL,分别注入液相色谱仪,依上法测定,即得。依上述色谱条件测定 Mk2901、Mk2902、Mk2903 批清开灵胶囊中栀子苷含量,结果见表 2。 3 讨论 栀子苷为环烯醚萜苷类,易溶解于甲醇等溶剂,溶解时采用超声处理,有利于促进样品中的栀子苷溶解。栀子苷在 238 nm波长处有最大吸收,故选定 238 nm 作为检测波长。流动相比较了乙腈-水(15∶85)和乙腈-水(10∶90)系统,栀子苷主峰均可与杂质峰分离,为缩短检测时间,故选择乙腈-水(15∶85)为流动相。 本试验建立的清开灵胶囊中栀子苷含量 HPLC 测定方法,灵敏度、稳定性及重复性能够符合含量测定的要求,而且操作简便,可以作为清开灵胶囊生产中栀子苷含量的测定方法。 |
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