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如果你曾经做过SDS-PAGE和Western blotting实验，你肯定会看到弯曲的或模糊的条带，不同于你的抗体数据表上显示的那些完美的条带形状。这么“妖娆”的条带，令人忍不住一起摇摆起来。 不要担心，通常您可以采取五个非常简单的步骤，使您的完美印迹再次呈现。 你花了几个星期的时间来培养你的稀有细胞，用昂贵的新化合物来处理它们，小心地收集和溶解你的样本，然后却把你的凝胶放在两个脏的玻璃板之间。所以要确保你的玻璃板和梳子在铸造之前是干净的，这是确保你铸造完美凝胶非常重要的一步骤。
凝胶铸造的一个主要问题是不适当的混合试剂，特别是丙烯酰胺。为了确保在凝胶中均匀地分离蛋白质，需要确保一个恒定的丙烯酰胺百分比。但同样的，你也要尽可能快地将配好的胶用于实验。一次彻底的混合凝胶试剂，接着是同样重要的脱气步骤，每次都能给你纯洁的凝胶。
相同的方式，缓冲buffer确保它们是新鲜的,重要的是调整到正确的PH值。我们经常发现我们的western blotting是重复不出来，使用将近6个月不新鲜的缓冲buffer，并将buffer一直放在阳光下，可能把buffer扔掉重新配置更有意义。 至少要检查一下buffer的pH值是必须的，因为它在您的蛋白质迁移中通过凝胶发挥重要作用。 如上所述，我们知道你希望尽快获得令人兴奋的结果，以高电压运行您的凝胶可能会导致您不得不再配胶并重新运行样品。通过在高电压下运行你的凝胶，缓冲液和凝胶会变热，这是您的凝胶翘曲和弯曲的主要原因。 减少关于条带弯曲，这一步对于确保您从印迹获得最准确的结果至关重要。尽管在最大体积中加载最大浓度蛋白质是有诱惑力的，但有时候减少上样量，可以确保您获得一个不错的条带而不是无法辨认的印迹。使用新的抗体，甚至是新的抗体批次，需要运用总蛋白质标准曲线进行测试。这个简单的步骤可以节省您的时间和样品，使您的分析更快捷。
好了，今天就策到这里，希望对大家有帮助。 |
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