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1、细胞复苏和冻存遵循“慢冻快融”，复苏细胞时尽可能短时间内使凝固的细胞冻存液融化，37度水浴箱中快速摇晃。 2、冻存细胞时每个冻存管的冻存液不要超过1ml，过多的冻存液会使细胞复苏时不易融化和融化时间过长。冻存液过多过满时，在冻存液凝固时体积膨胀，易使冻存管撑开。 （冻存液过多） 3、冻存时，冻存管盖子千万拧紧，否则冻存管内进入液氮。待复苏时，冻存管内液氮受热迅速挥发膨胀，导致冻存管爆炸（血的教训）。 4、融化冻存的细胞后，转到15ml离心管中，向离心管中缓慢滴加新鲜的培养基，使细胞内的DMSO从细胞中释放出来。 5、DMSO有毒，且易被皮肤吸收，做好防护措施。DMSO本身抑菌，不会长菌，切记打开DMSO瓶盖时勿使用本生灯对瓶口灭菌，否则极易使瓶口的DMSO挥发导致整个细胞房充满了DMSO的毒气。 6、刚复苏的细胞很脆弱，吹打时动作轻柔。冰箱中拿出的培养基可以预先在培养箱中复温再使用。 7、DMSO对细胞有毒性，细胞复苏后，待细胞贴壁或第二天更换新鲜培养基，同时去除死细胞。 8、细胞传代、铺板，各种规格培养皿参数（仔细研究下，非常实用）： 9、对于容易聚团和粘附的细胞，刚刚铺均匀，摇晃两下就发现细胞又聚成一团一团。应对方法：用1ml枪反复吹打细胞，吹均匀后立刻放入培养箱，不要摇晃也不要观察，减少细胞晃动相互接触。 10、细胞状态不好了，怎么调整都没有用，可以先将细胞进行冻存后再复苏，细胞会好很多，同时也会死很多，这叫优胜劣汰，适者生存，存活下来的都是优良的种子。
12、细胞如果污染了，并且没有冻存的细胞，且非常珍贵，如何挽回？将培养的细胞接种于裸鼠皮下，并成瘤，将瘤组织再重新剪碎消化后培养到培养皿中培养，由于裸鼠具有一定的免疫力，可以抵抗细菌感染，重新培养的瘤细胞则是无菌的，前提是该细胞能在裸鼠皮下成瘤。（原来裸鼠还有这个功能！）
13、冻存细胞时冻存液7：2：1，也可以5：4：1，血清多多益善。冻存时遵守梯度降温，缓慢降温，可以使用梯度降温盒，使用前将冻存盒复温。没有冻存盒可以4度放置20min, -20度放置20min, -80度过夜后移致液氮中。
14、细胞培养三条原则：1、维持营养：不能长时间不换液不传代，细胞不能过密过多 2、避免污染：防止细菌，真菌，支原体污染，遵守无菌原则 3、防止消化过度：显微镜下观察并控制消化情况。 15、各种培养试剂建议分装个人使用，发现污染，可以毫不心疼的扔掉，同时可以避免交叉污染。 16、细胞培养箱上面的3个参数， CO2、水、温度。任何一个出了问题都会导致细胞毁灭性的打击，建议每次检查下是否正常。 |
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