生活终于对我冰箱里的蛋白样本下手了！

你是不是一个严谨做实验的好孩纸呢？但是，生活啊，终究还是要对你这个小可爱下手的。一个童鞋提了个问题，他最近一直出这样的事，就是放在-80℃的蛋白样本就是这么不靠谱。刚抽出来的条带浓郁，但在-80℃放了一个月，做的Western Blot就咖喱给给了：

这到底是为什么呢？不是不管什么东西，只要放到-80就妥妥的么？这就涉及到蛋白质样本保存的问题了，你刚抽出来的蛋白没用完，不要扔，裹一层面包糠……呸呸呸……直接放-80℃冰箱就没事了么？

当然不行，蛋白样本抽提完保存，也是会降解的，2010年的冷泉港Protocol里：

他们做了个4℃冰箱保存样本的实验，发现0.25mg/ml的蛋白样本在4℃冰箱放5天，样本降解一半。

当然，你会说4℃本来就不保险，但实际上吧，如果你的蛋白样本在Buffer里，直接放到-80℃其实更不保险。因为你应该学过高中化学，应该知道，盐水很难结冰这个事情，所以Buffer一旦放进-80℃缓慢冻结的话，水缓慢结晶，没有来得及结冰的溶液中盐浓度就会变得非常高，盐析后的蛋白一部分会吸附到管壁，同时也会被水的晶格破坏，导致降解。

那你要问了，-80℃的冰箱都不行，那要怎么保存蛋白样本？

谁说-80℃冰箱不行了，我说的是不能直接保存到-80℃冰箱。蛋白保存到这样超低温的冰箱的话，有几点要注意的。

第一点，浓度不能太低：

在蛋白冷冻的过程中，会吸附在管壁上，造成蛋白损失。本来浓度不高的话，等你再冻融，就基本上啥都没有了。一般要保证有1mg/ml。当然，如果实在浓度不够可以加一些BSA补充一下，减少损失。

第二点，加入保护剂：

实际上蛋白如果在溶液中保存的话，最好是加入10%~50%的甘油作为保护剂，防止被冰晶损伤。当然也不要用磷酸缓冲液，因为磷酸盐在低温会造成相变，更容易破坏蛋白，当然还需要考虑pH值等等别的因素哈。实际上有很多公司是有专门的蛋白保存液的。

第三点，急速冷冻：

这里其实推荐的方法是用乙醇干冰浴来冷冻蛋白样本，就是一钵子酒精，方在干冰里，然后蛋白样本直接浸入酒精冷冻，这样放到-20℃冰箱也能放蛮久。如果放到-80℃，可以用液氮。当然，冻融的时候和复苏细胞一样，用温水浴迅速融解。

第四点，分装：

即使放到-80℃，也并不完全保险，虽然能存放久一些，但是有一个问题，不能冻融超过两次，所以，你需要把蛋白分装到小管中，一次只取一个用，这样才能把蛋白样本保存得更久些。

当然，实际上终极的蛋白保存办法，就是：

做成冻干粉，当然，我也知道，你们实验室估计没有冻干机……不过还是听过有用高浓度硫酸铵来沉淀蛋白保存的办法。

好了，现在知道蛋白为什么会放-80℃都不一定保险了么？ps：锈湖真的蛮好玩，好了，今天就先策到这里吧，祝你们心明眼亮。