免疫共沉淀是利用抗原和抗体的特异性结合来确定两种蛋白质在细胞内相互作用的一种有效方法。细胞内蛋白质存在形式如下图所示: 那么CO-IP实验怎么做呢?首先目标蛋白在细胞中,因此第一件事就是裂解细胞,选择细胞裂解液的原则是什么呢?充分裂解细胞的同时并且不破坏蛋白复合体结构: 得到细胞裂解液后,此时需要派兵去抓其中的一个蛋白。方法是派出“特警Y”寻找“嫌疑犯A”,这个特警就是特异性很高的抗体,用抗体捕获目标蛋白: 最终目标蛋白被抗体警察捕捉到,此时抗体及目标蛋白均在细胞裂解液中,为了后续的研究,需要把抗体抗原复合物从溶液中“拖”出来呢?如何实现这个过程呢?可以利用Protein A特异结合抗体的性质,把Protein A固定在一个质量很大的分子上,如磁珠或者琼脂糖珠,也就是很多小伙伴说的Beads。 琼脂糖珠采用离心的方法进行收集,磁珠方法利用磁力架进行吸附收集,磁珠方法对整个复合物机械损伤小,且方便快捷,越来越受到广大科研爱好者的欢迎。此时已经拿到了目标蛋白,最后需要进行目标蛋白的分析: 最终得到两个蛋白可能存在相互作用的结论,整个实验过程如下图所示: 免疫共沉淀实验看起来也没想象的那么难吧!您get到点了么?GE生命科学在层析领域的多年经验及高性能多元化产品在免疫沉淀实验中受到广泛认可,GE提供高品质的Protein A磁珠和琼脂糖珠以及全套Western实验所需用品如高品质的ECL显色试剂盒和PVDF膜等: 好了,今天的免疫共沉淀就说到这里,欢迎小伙伴们留言。 中源生物是GE公司授权的北方区总代理 如有相关问题请拨打免费服务电话咨询 400-8100-881 如您对我们的服务有任何的意见和建议请发至如下邮箱 service@sinozhongyuan.com 中源生物 专业服务,助力科技 推动生命科学事业,服务于全人类健康 建立中国专业的生命科学领域产品经销平台 |
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