专利名称：：蒙脱石在制备药物中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及蒙脱石的新用途，具体涉及蒙脱石在预防和治疗感冒的蒙脱石在制备药物中的应用。
背景技术：
：目前，蒙脱石在药物中的应用均是通过消化道给药，主要治疗胃肠道疾病。2007年批准的中国专利公开的蒙脱石的新用途是治疗慢性肾功能衰竭疾病也是通过消化道给药进行治疗，到目前为止，尚未有通过其他给药方式治疗疾病的报道。蒙脱石是典型的2:l型含结晶水的层状硅酸盐矿物，具有高分散性、悬浮性、膨润性、粘结性、吸附性、阳离子交换性等许多优良特性。蒙脱石作为药用具有悠久的历史，口服后药物可均匀地覆盖在整个肠腔表面，具有极高的定位能力，可维持6小时之久。用于治疗腹泻，蒙脱石可吸附多种病原体和消化道内毒素，将其固定在肠腔表面，而后随肠蠕动排出体外，从而避免多种病原体和消化道内毒素对机体的损伤。我国唐代医学名著《本草拾遗》中记载'甘土无毒，主治草药及诸菌毒，热汤调节器末服之'。甘土即为膨润土(主要成分为蒙脱石)，可广泛用于治疗急、缓性腹泻，治疗食管炎、胃炎、结肠炎、肠易激综合症。由于蒙脱石服后不易吸收，不进入血液循环，应用期间十分安全，无毒性反应，近年用于儿科疾病治疗的临床用途不断被拓宽。例如中国专利ZL200510082757.0公开了蒙脱石治疗慢性肾功能衰竭的应用。中国专利ZL03121876.8公开了蒙脱石治疗甲亢，口臭的应用等。
发明内容本发明的目的在于提供蒙脱石在制备药物中的应用，通过上呼吸道给药，用蒙脱石预防和治疗感冒，并提供用蒙脱石预防和治疗感冒的药剂类型，同时提供预防和治疗感冒的方法。为实现上述目的，通过以下技术方案来实现蒙脱石在制备预防和治疗感冒药物中的应用。蒙脱石在制备预防和治疗感冒的药物剂型是蒙脱石滴鼻液，蒙脱石在制备预防和治疗感冒的药物剂型是蒙脱石喷雾剂，蒙脱石在制备预防和治疗感冒的药物剂型是蒙脱石气雾剂。本发明所述感冒包括普通感冒和流行性感冒。普通感冒是一种轻微和自限性的疾病，常由副流感病毒、鼻病毒、呼吸道合胞病毒、柯萨奇病毒及冠状病毒等引起。人通过接触环境表面有病毒的分泌物，吸入含大量病毒的呼吸道分泌物的空气被传染。病毒侵人上呼吸道，导致上呼吸道正常定居的菌群改变和宿主的炎性反应、损伤了宿主呼吸道上皮和基质蛋白，使细菌侵入正常时无菌的区域，如鼻窦、中耳和气管支气管等，使细菌沉淀到这些区域，加上这些区域出口的梗阻和粘膜清洁作用的损伤，导致继发性细菌感染。普通感冒的临床表现，主要症状为流涕、鼻塞、喷嚏、咽喉痛、头痛和咳嗽。可能有低热，其他不适包括轻度眼痛、嗅觉和味觉缺失、耳堵感、说话声有鼻音。病程大约1周，约l/4的病人可持续到2周。目前没有真正的'治愈'感冒药，主要有抗组胺药和非甾体类抗炎药，可以很好的缓解喷嚏、流涕、头痛。抗组胺药可致口、鼻、喉发干、腹痛、腹泻、呕吐、嗜睡、眩晕等不良反应。非甾体类抗炎药大多数具有抑制造血功能的不良作用。预防普通感冒的办法是阻断传播，注意隔离，空气消毒，避免接触污染物，洗手和避免手鼻、手眼自然接触；鼻腔内使用药物阻断病毒侵入鼻黏膜细胞。流行性感冒简称流感，是由甲、乙、丙三型流感病毒分别引起的急性呼吸道传染病。甲型流感病毒常以流行形式出现，可以造成世界性的大流行。乙型流感病毒常造成局部暴发，不引起世界性大流行。丙型流感病毒以散发形式出现，主要侵袭婴幼儿，不引起流感流行。流感病毒只有通过鼻腔才会致病。主要通过空气飞沫和接触传播，将流感病毒注射于人则不发病。病毒首先侵入鼻粘膜的纤毛上皮细胞，进一步进人气管支气管，在局部区域造成严重破坏，在l-2d内引起上呼吸道广泛炎症。流感病毒感染少数细胞后，复制出大量的病毒颗粒，释放后再感染其他细胞，造成感染扩散。流感的临床表现有畏寒、发热、体温可达38-4(TC、头痛、无力、眼痛、全身酸懒、恶心、流涕、鼻塞、打喷嚏等、面部潮红和球结膜充血。流感产生的全身中毒症状是由于呼吸道黏膜破坏，部分病毒及其产物进入血流造成。在流感预防上至今还没有真正地突破。目前国际上常用的流感病毒疫苗为纯化的、多价灭活疫苗。当今所使用的有3种类型，各有利弊。①全病毒粒灭活的(制备简单，有时会引起不良反应)；②半裂解的(可降低不良反应，但制备过程繁琐)；③亚单位疫苗(安全性好，但抗体应答效果差，造价高)。疫苗株需随流感病毒株抗原的变异而及时更换，否则无法保证预防效果。目前治疗流感的药物有金刚烷胺和金刚乙胺能特异性的抑制甲型流感病毒的复制，对乙型流感病毒无效，这两种药物均有共同的交叉敏感性或耐药性，副作用为易产生神经毒性及易产生耐药性。病毒唑在体外实验中证实既能抗甲型也能抗乙型流感病毒，但临床无明显抗病毒作用和治疗效果。本发明既可预防同时也可治疗普通感冒和流行感冒，长期使用不产生耐药性，无毒、无副作用。蒙脱石加水制成滴鼻液或喷雾剂或气雾剂后，蒙脱石通过颗粒间的渗透膨胀和层间水，颗粒分散，叠层之间发生剥离，带负电的层面与端面相互作用，交联缔合形成水化凝胶。蒙脱石水化凝胶除有显著的粘附性，能与上呼吸道表面的粘液结合，显著增强粘液的内聚力和粘弹性，牢固地覆盖于鼻粘膜表面，形成隔离保护膜，有效的阻断病毒侵入鼻黏膜细胞。使用蒙脱石滴鼻液或喷雾剂或气雾剂，可达到预防感冒的目的。蒙脱石滴鼻液或喷雾剂或气雾剂进入上呼吸道后，可覆盖在整个上呼吸道表面，通过吸附作用及'卡房式'凝胶结构，可将已进入上呼吸道的病毒、病菌及它们产生的毒素吸附、固定，而后随鼻涕排出体外，使其失去致病作用，并能抑制病毒的复制和传播。使用蒙脱石滴鼻液或喷雾剂或气雾剂，可达到治疗感冒的目的。申请人:用蒙脱石预防和治疗感冒做出的动物试验和临床资料总结如下—、动物试验报告蒙脱石滴鼻液对流感病毒甲型(flu-A)感染小鼠的防治作用41、材料1.1动物昆明种小鼠，雌雄兼用，体重18-22克，许可证号SCXK(鲁)2005-0015，由山东中医药大学实验动物中心提供。饲养条件塑料盒底部铺一层松软的锯末饲养，雌雄分养，每盒5只，自由饲养，温度控制在2025t:，通风良好，湿度5560%，正常饲养一周后供试。1.2流感病毒甲型(flu-A):1995年北京地方流行株，2004年引自中国CDC病毒病所流感病毒室。低温冻存备用。实验前取毒种用流水冲融，以无菌生理盐水稀释成每0.05毫升含15个LD50的浓度，放冰水中备用。1.3药物浓度为5%、20%、30%(g/ml)的蒙脱石滴鼻液，有济南康众医药科技开发有限公司提供。巴韦林滴鼻液(10毫升50毫克)，购于宏济堂药店。2、方法2.1分组及给药将小鼠随机分为空白对照组、模型组、利巴韦林滴鼻液组及蒙脱石滴鼻液5%、20%、30%(g/ml)剂量组，共6组，每组30只。利巴韦林滴鼻液每日滴鼻3次，每次0.05毫升。蒙脱石滴鼻液每日滴鼻3次，每次O.O毫升，空白对照组和模型组给予等量的生理盐水。连续给药1周。2.2病毒感染给药后第2天，除正常对照组外，各组小鼠以15个LD50流感病毒滴鼻感染，每只(次)0.05毫升。2.3测定指标2.3.1小鼠死亡率，感染小鼠后记录不同时间的小鼠体重，观察小鼠发病症状，记录小鼠死亡时间和死亡数。每天观察，直至感染后第7d。3、结果3.1各组实验小鼠行为状态的观察空白对照组小鼠精神状态良好，机警，活动敏捷，毛发有光泽，饮食良好，呼吸均匀，体重自然增加。模型组小鼠第l天无明显异常症状。第2天稍有倦怠，毛发出现凌乱，渐失光泽，呼吸急促，不喜活动，易惊。第3天上述症状加重，开始死亡，死亡时出现抽搐痉挛症状。利巴韦林滴鼻液组小鼠在病毒感染后第3天出现毛发凌乱、行动迟缓、呼吸急促等症状，第7天后症状基本消失，其间死亡3只。蒙脱石滴鼻液5%、20%、30X(g/ml)各浓度组在病毒感染后第3天开始出现毛发凌乱、蜷縮、不喜活动、呼吸急促等症状的只数是10只、5只、3只，其他小鼠无明显异常症状，各浓度组发生死亡的只数是5只、3只、l只。结果见表l。表1蒙脱石滴鼻液对流感病毒甲型(flu-A)感染小鼠的防治保护作用钥别3M感染^CR)感染后第3d殿'殺末感染ii教殿伞(空臼对照组—30()300100模卿—30300誦0*』203030腦0*J发K/h消罢液30303雄904J203052516.783-3*自51033.3SB.CT+J3.2蒙脱石滴鼻液对流感病毒甲型(flu-A)感染小鼠的死亡保护作用浓度为5%、20%、30%(g/ml)的蒙脱石滴鼻液，治疗流感病毒甲型(flu-A)感染小鼠的死亡保护率分别为50%、40%、66.7%。利巴韦林滴鼻组的死亡保护率为90%。模型组的死亡保护率为23.3%。结果见表2。表2蒙脱石滴鼻液对流感病毒甲型(flu-A)感染小鼠的死亡保护作用~死广l之教存话只教死广军(n)死广W军(10空白对照组IJuJfJUl[頁J核M組30T1TZ3—3.利巴+林sa劲20303271090一魏石速顿303i233—3纖—T.獼532騸，，i(〕55结果说明蒙脱石滴鼻液对流感病毒甲型(flu-A)感染小鼠有非常好的预防和治疗作用，可用于预防和治疗流感。二、体外抗病毒报告1、实验目的检测蒙脱石滴鼻剂体外吸附灭活病毒作用。2、实验材料(1)试验细胞株①MDCK(流感病毒甲型、流感病毒乙型病毒株宿主细胞)，2004年引自中国CDC病毒病所流感病毒室。②Hep-2细胞(呼吸道合胞病毒宿主细胞)，2002年引自中国医学科学院基础所细胞库，本科室液氮冻存。(2)试验病毒株①流感病毒甲型(flu-A):1995年北京地方流行株，2004年引自中国CDC病毒病所流感病毒室。②流感病毒乙型(flu-B):来源背景同流感甲病毒。③呼吸道合胞病毒(RSV):1998年引自中国CDC病毒病所毒种库，本科室保存。(3)受试样品蒙脱石滴鼻剂，为乳白色混悬液，济南康众医药科技开发有限公司提供。生产日期2009.9.20。(4)试验设备4.1二氧化碳培养箱ThermoForma公司产品，3111型。4.2液氮罐风华机械厂产品，YD-30型。4.3细胞培养液RPMI1640，GIBCO公司产品，按说明书配制，加10%新生牛血清为细胞培养液，加2%新生牛血清为细胞维持液。4.4磷酸盐生理盐水NaCL8g，KCL0.2g，KH2PO40.2g，Na2HP04.12H20，加双蒸水至100ml，121°C20min蒸汽灭菌。4.5细胞消化液含0.25%胰酶，用磷酸盐生理盐水配制，用滤过直径为0.2微米的滤器过滤除菌，-201:存放。4.6细胞染液1%中性红。4.7脱色液0.05mol/L冰乙酸加50%乙醇4.8倒置显微镜OLYMPUS公司产品。4.9超低温冰柜-86°C，美国ThermoForma公司产品。3、方法(l)检验依据《医学病毒学基础及实验技术》、《新药(西药)临床研究指导原则》。(2)检测方法细胞病变法2.1复苏、制备Hep-2、MDCK单层细胞将液氮冻存的细胞管在37t:速融，1000r/min离心5min，无菌条件下去上清，沉淀用细胞培养液悬浮，置细胞培养瓶中37°C、5%(^02条件下培养，3日后长成单层备用。2.2活化增殖病毒将冻干保存的流感病毒甲型、流感病毒乙型、呼吸道合胞病毒株分别接种MDCK细胞和Hep-2细胞，用细胞维持液置37°C、5%C02条件下培养，当细胞出现70%病变时终止培养，轻轻倾维持液，用PBS洗三次，加蒸馏水2ml冻融3次，2000r/min离心20min，弃沉淀，上清分装青霉素小瓶，置-86°0冰箱，待测定病毒毒力。2.3病毒毒力测定将病毒液做10倍比系列稀释，依次横向接种于96孔板内的单层细胞上，每孔100iU，相同稀释度纵向重复3孔同时设有细胞对照和空白对照。置37t:、5XC02恒温培养箱孵育，显微镜下观察细胞病变作为判断指标，5d时终止培养，用1X中性红37t:染色2h，用PBS洗3次去除游离染料，每孔内加100iU脱色液，用酶标仪在540nm处读取吸光度A值，用公式①计算细胞存活率，然后用Reed-Muench法计算病毒毒力，用TCIDs。/ml表示。公式①细胞存活率(％)=(病毒孔A值-空白对照孔A值)/(细胞对照孔A值-空白对照孔A值)X100X2.4蒙脱石滴鼻剂体外灭活作用检测2.4.1体外灭活将定量的病毒(流感病毒甲型TCID5。/ml为(y/mL、流感病毒乙型TCID5。/ml为103/mL、呼吸道合胞病毒TCID5。/ml为105mL)500y1分别与20%。10%、5%蒙脱石滴鼻剂等容量混合，37°C、5%CO2恒温培养箱孵育60min，将各组样品用2000r/min离心lOmin获得上清液，然后分别用本文2.3所述方法进行滴定病毒含量(TCIDs。/mL)，平行设有病毒对照组、阳性药物对照组(利巴韦林)、正常细胞对照组、药物毒性对照组。通过组间比较病毒TCID5。/ml指数变化，判断蒙脱石滴鼻剂对病毒吸附灭活作用。4、结果(1)病毒毒力测定流感病毒甲型、流感病毒乙型、呼吸道合胞病毒TCID50/mL分别为102/mL、103/mL、1010/mL。(2)脱石滴鼻剂吸附灭活病毒效果监测将不同浓度的蒙脱石滴鼻液与病毒作用lh后，其上清液中病毒含量显著降低，见表1。表1蒙脱石对病毒感染毒力TCID50的影响I^^Sffl孝J巴^Mft^B-石滴晶剤tableseeoriginaldocumentpage8注括号中为与病毒对照组比较病毒TCID50下降指数从上表可明显看出，不同浓度的蒙脱石滴鼻液(20%、10%、5%)对流感病毒甲型、流感病毒乙型、呼吸道合胞病毒均有良好的吸附灭活作用，经过在37t:、5XCCV恒温培养箱孵育60min，flu-ATCID50分别下降1个指数，flu-B下降3个指数，RSV下降5个指数。表明20%、10%、5%不同浓度的蒙脱石滴鼻剂均具有强大的吸附病毒的作用。5、结论经检测，蒙脱石滴鼻液对甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒病毒有直接吸附沉降灭活作用。可用于预防和治疗感冒。三、用蒙脱石喷雾剂和滴鼻液治疗流行性感冒的临床效果统计资料自愿受试者461例，(l)有感冒患者接触史；(2)出现急性发热、畏寒、咽喉部干痒疼痛，伴有咳嗽、鼻塞流涕等其他症状；(3)检查咽部明显充血或扁桃体肿大、充血；(4)血液化验检查白细胞计数正常或偏低，淋巴细胞比例升高；(5)排除其它部位的感染。114例患者用每100毫升含蒙脱石10克的蒙脱石喷雾剂、77例患者用每100毫升含蒙脱石15克的蒙脱石喷雾剂、62例患者用每100毫升含蒙脱石20克的蒙脱石喷雾剂，患者喷药前匀把鼻腔清理干净，将药瓶的喷嘴插入鼻孔，每次每鼻孔l喷，每喷0.2毫升，每日喷2-4次。需要说明5例患者用100毫升含蒙脱石5克的蒙脱石喷雾剂，治疗方法与上述相同，但每日每鼻孔必须喷3喷，每喷0.2毫升，每日必须喷4次。92例患者用每100毫升含蒙脱石15克的蒙脱石滴鼻液、80例患者用每100毫升含蒙脱石10克的蒙脱石滴鼻液、36例患者用每100毫升含蒙脱石20克的蒙脱石滴鼻液，用药前，先将鼻腔清理干净，头部向后倾斜使鼻孔朝上，将药物滴入鼻孔，每个鼻孔均滴2喷，每滴0.06毫升，每日滴2-4次，药液滴入后捏鼻翼数次，并保持鼻孔朝上5分钟，使药物与鼻腔黏膜充分接触。结果痊愈242例，显效173例，有效45例，有效率为100%。预防感冒统计资料自愿受试者37例，年龄为25-31岁，6人，37-41岁，4人，49-62岁，27人；受试者每遇气候变化，必患感冒，每与感冒患者接触，必被传染，每年感冒次数不计，使用每100毫升含蒙脱石8克滴鼻液一年，每日两次，每次每个鼻孔各两滴，每滴0.0625毫升，跟踪观察一年受试者没有一例发生感冒，说明蒙脱石滴鼻液预防感冒效果良好。本领域技术人员公知，蒙脱石滴鼻液或喷雾剂或气雾剂，制备工艺基本一致，只是最后分装于不同的容器，得到不同的剂型，进入鼻腔或上呼吸道后，3种剂型都是蒙脱石混悬液，其临床效果应当一致。综上所述，本发明的优点总结包括以下几方面(l)本发明对药用蒙脱石发掘了新的用途，开拓了一个新的应用领域。(2)蒙脱石滴鼻液或喷雾剂或气雾剂对普通感冒和流行性感冒既可预防又可治疗。(3)蒙脱石仅作用于上呼吸道，机体不吸收，无毒，无副作用。[OOSS](4)病毒和细菌不产生耐药性。(5)原料易得，价格低廉，治疗成本低，上述优点明显优于目前常用防治流行性感冒的药物。具体实施例方式蒙脱石在制备预防和治疗感冒药物中的应用，感冒包括普通感冒和流行性感冒。蒙脱石在制备预防和治疗感冒的药物剂型是蒙脱石滴鼻液，蒙脱石在制备预防和治疗感冒的药物剂型是蒙脱石喷雾剂，蒙脱石在制备预防和治疗感冒的药物剂型是蒙脱石气雾剂。采用蒙脱石制备喷雾剂和滴鼻液，用于治疗甲型、乙型及丙型流感病毒引起的急性呼吸道传染病。用蒙脱石喷雾剂预防和治疗感冒的方法是将患者鼻腔清理干净，头部保持与地面垂直或向前倾斜的角度，将蒙脱石喷雾剂药物容器的喷嘴置入鼻腔内，每个鼻孔每次均为l-3喷，每次喷0.1-0.2毫升，每日喷2-4次。用蒙脱石滴鼻液预防和治疗感冒的方法是将患者鼻腔清理干净，头部向后倾斜使鼻孔朝上，将药物滴入鼻孔，每个鼻孔均滴2-3滴，每滴0.0625毫升，每日滴2-4次，药液滴入后捏鼻翼数次，并保持鼻孔朝上5分钟，使药物与鼻腔黏膜充分接触。蒙脱石在用于预防和治疗感冒中的应用，其药剂是以滴鼻液和喷雾剂为主要剂型，也可做成气雾剂。各种剂型药物中蒙脱石含量均为每100毫升含蒙脱石5-20克。蒙脱石滴鼻液、喷雾剂和气雾剂均以蒙脱石为主药，添加医药辅料，加水制成每100毫升含蒙脱石5-20克的蒙脱石滴鼻液、蒙脱石喷雾剂或蒙脱石气雾剂。所用医药辅料均为医用滴鼻液、喷雾剂或气雾剂常用辅料。下面举例说明三种剂型的制备方法实施例1制备蒙脱石滴鼻液称取蒙脱石50克，琼脂5克，加入去离子水至1000毫升，搅拌均匀，再将搅拌均匀的混合液，用胶体磨处理成蒙脱石颗粒细度小于20ym的均匀液体，经钴6。照射灭菌，分装即得每100毫升含蒙脱石5克的蒙脱石滴鼻液。实施例2制备蒙脱石滴鼻液称取蒙脱石100克，甲基纤维素10g，加入生理盐水至1000毫升，搅拌均匀，再将搅拌均匀的混合液，超声处理成蒙脱石颗粒细度小于45ym的均匀液体，经煮沸15分钟灭菌后分装即得每100毫升含蒙脱石10克的蒙脱石滴鼻液。实施例3制备蒙脱石滴鼻液称取蒙脱石200克，加入水至1000毫升，搅拌均匀，经煮沸20分钟灭菌后分装即得每100毫升含蒙脱石20克蒙脱石滴鼻液。实施例4制备蒙脱石喷雾剂称取蒙脱石80克，苯甲酸钠1.5克加入水至1000毫升，搅拌均匀，再将搅拌均匀的液体，用胶体磨处理成蒙脱石颗粒细度小于10ym的均匀液体，经煮沸20分钟灭菌后分装于喷瓶，即得每100毫升含蒙脱石8克的蒙脱石喷雾剂。实施例5制备蒙脱石气雾剂称取蒙脱石150克，尼泊金2克加入水至IOOO毫升，搅拌均匀，再将搅拌均匀的液体，用胶体磨处理成蒙脱石颗粒细度小于10ym的均匀液体，经煮沸20分钟灭菌后，分装于容器，装阀门轧紧，压入抛射剂，即得每100毫升含蒙脱石15克的蒙脱石气雾剂。权利要求蒙脱石在制备药物中的应用，其特征在于在制备预防和治疗感冒药物中的应用。2.根据权利要求1所述的蒙脱石在制备药物中的应用，其特征在于制备预防和治疗感冒的药物剂型是蒙脱石滴鼻液。3.根据权利要求1所述的蒙脱石在制备药物中的应用，其特征在于制备预防和治疗感冒的药物剂型是蒙脱石喷雾剂。4.根据权利要求1所述的蒙脱石在制备药物中的应用，其特征在于制备预防和治疗感冒的药物剂型是蒙脱石气雾剂。全文摘要本发明公开了一种蒙脱石在制备药物中的应用，蒙脱石在制备预防和治疗感冒药物中的应用，感冒包括普通感冒和流行性感冒。蒙脱石在制备预防和治疗感冒的药物剂型是蒙脱石滴鼻液，蒙脱石在制备预防和治疗感冒的药物剂型是蒙脱石喷雾剂，蒙脱石在制备预防和治疗感冒的药物剂型是蒙脱石气雾剂；本发明的优点总结包括以下几方面本发明对药用蒙脱石发掘了新的用途，开拓了一个新的应用领域。蒙脱石滴鼻液或喷雾剂或气雾剂对普通感冒和流行性感冒既可预防又可治疗。蒙脱石仅作用于上呼吸道，机体不吸收，无毒，无副作用。病毒和细菌不产生耐药性。原料易得，价格低廉，治疗成本低，上述优点明显优于目前常用防治流行性感冒的药物。文档编号A61K9/12GK101690729SQ20091030859公开日2010年4月7日申请日期2009年10月21日优先权日2009年10月21日发明者张为胜,张晶,张梅雪,徐东峰,李诗标,许翠萍申请人:济南康众医药科技开发有限公司
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