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您的好友:三通道荧光Western Blotting成像系统,上线啦~

 生物_医药_科研 2019-01-30


自2017年Typhoon NIR双通道近红外荧光成像系统面世以来,已有不少客户选用Typhoon NIR系统获取高质量近红外荧光Western Blot信号,得到重复性高、定量准确的科研数据。

与传统化学发光的动态信号相比,Typhoon NIR的近红外信号不受ECL底物浓度、底物类型、及曝光时间的影响,扫描信号与目的蛋白浓度成线性关系,定量更加准确。


在近红外双通道检测的基础上,GE研发出新一代Typhoon NIR plus系列产品,蓝色或绿色激光器可任意搭配的检测系统,为科研学者提供更优秀的工具。

Typhoon NIR plus三通道荧光Western Blot

好处多多

  1. 允许同时检测多种目的蛋白,

  2. 提高检测准确性和可重复性,

  3. 避免Stripping和Reprobing的假阳性和信号损失。

  4. Western Blot实验(替换成Typhoon NIR plus)可以进行归一化分析处理,以校正泳道间或样本间的差异。(常使用内参蛋白归一化方法。但不少实验体系中无法找到表达恒定的内参蛋白,特殊的组织、细胞或是特殊的实验条件,都可能影响内参蛋白的表达。)GE专利的Cy5总蛋白染色归一化不同于内参蛋白,不受生物学差异、实验条件影响,且较其他总蛋白染色方法灵敏度更高。


(图中,红色通道为总蛋白通道。)

下面我们来举个实验案例:

1、CHO细胞裂解液稀释系列的WB检测。利用Alexa Plus 800 Ab检测靶蛋白ERK,Alexa Plus 680检测ACTIN 内参蛋白。

请看下图:


1

Sample CHO cell lysate, two-fold dilution starting at 40 µg

2

Gel  SDS-PAGE 8-18%

3

Membrane   Amersham Protran Premium  NC 0.45

4

Detection      

Primary antibodies

Rabbit anti-ERK

Muouse anti-actin

Secondary antibodies

Alexa Plus 680 GAM

Alexa Plus 800 GAR

5

Imaging Excitation   Emission Filter

685 nm IRshort   720BP20 (green)

785 nm IRlong     825BP30 (red)


2、同样是CHO细胞裂解液稀释系列的实验,NIR plus可以同时检测三种不同种属来源的抗体(兔、鼠、羊)。


1

Sample CHO cell lysate, with recombinant GST in lane 3 and 4

2

Gel  SDS-PAGE 8-18%

3

Membrane  Amersham Protran™ Premium 0.45 µm NC

4

Detection      

Primary antibodies


Rabbit anti-ERK

 Mouse anti-GAPDH and anti-actin

Goat anti CHO-HCP and anti-GST

Secondary antibodies

Goat anti-mouse Alexa™ Plus 800

Goat anti-rabbit Alexa Plus 680

Donkey anti-goat DyLight™ 549


5

Imaging Excitation   Emission Filter

532 nm     Cy3       570BP20 (green)

685 nm     IRshort  720BP20 (red)

785 nm     IRlong    825BP30 (blue)


2019年,GE在北京、上海均成立了demo center,欢迎小伙伴们踊跃报名试用我们的新产品,将Western Blot定量分析做的更好,发表文章分数更高。(此处应有掌声)


(图中,红色通道为总蛋白通道。)


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