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作者：蚍蜉玉 转载请注明：解螺旋·临床医生科研成长平台 在一个细胞的圈圈里，越来越多的RNA被发现，显得越来越拥挤，为此需要一个领导者主持大权，来保证RNA的世界里虽形式各异但是各司其职，让每个RNA都能发挥其长处，相安无事。长链非编码RNA以其独特（够长）的优势拿到了这个offer，开始在细胞的职场里，“拉拢”拉拢小RNA，“离间”mRNA，进而维持RNA届的和平相处。 0 知识普及 长链非编码RNA是一个长度大于200nt的RNA，它的最大的特点就是不能编码蛋白，而且在基因，表观遗传以及转录后调节方面都发挥重要的作用，进来越来越参与多样癌症的起始和进程阶段。 EMT：上皮间质转移，在肿瘤转移时会有相关蛋白因子的表达水平发生变化。 由今天的题目《Long non-coding RNA 657 suppresses hepatocellular carcinoma cell growth by acting as a molecular sponge ofmiR-106a-5p to regulate PTEN expression》（回复170925可下载，一周有效） 小编做出总结，以下三点可能是文章研究的方面： 1. Lnc RNA 657 是如何而来？可能是从芯片分析而来，或者从阅读文献而来，或者是用PCR验证而来； 2. Lnc RNA 657抑制肝癌细胞的生长会从哪几个方面入手？可能是从细胞增殖，细胞周期，细胞凋亡，细胞迁移，细胞浸润等方面入手； 3. Lnc RNA 657 发挥2条目中的功能通过的机制是与PTEN mRNA竞争性结合小RNA miR-106a-5p 。 好了，那就带着这几点来看看内容吧！ 1 LINC00657在肝癌细胞组织和恶性肝癌细胞系中的表达水平是下降的 第一：课题组选择了49位病人的肝细胞癌症组织和癌旁正常组织进行RT-PCR实验，检测LINC00657 的表达水平，结果发现在肝癌细胞组织中的表达水平与对照组相比是下降的。 第二：课题组选择了6种肝细胞癌的细胞系SMMC-7721, Huh7, HCCLM3, Hep3B, Bel-7402,和HepG2以及正常肝细胞LO2进行RT-PCR实验，检测LINC00657 的表达水平，结果表明HepG2与其它5种细胞系相比表达水平最低，Huh7与其它5种细胞系相比表达水平最高。 第三：课题组根据以上的两个结果，继续探讨了LINC00657 的表达水平与临床特征之间的具体关系。由下表可知，LINC00657 的表达水平与肿瘤的大小，肿瘤级别，以及浸润能力相关table。 另外，从生存资料分析的角度鉴定出，LINC00657 的表达水平若高，其总的生存时间越久，而水平越低的其生存时间越短。 以上的这些结果表明，LINC00657 可能与肝肿瘤病人的生成及预后相关。 2 LINC00657 抑制了肝癌细胞的增殖和细胞周期 第一：课题组在HepG2 和 Huh7两种细胞系中过表达和敲减LINC00657，用CCK8技术检测过表达LINC00657的HepG2细胞的活性变化。 结果表明与对照组相比，其显著抑制了HepG2细胞的增殖；而在Huh7中敲减LINC00657后，cck8技术检测细胞活性与对照组相比，显著升高。 但是，有趣的是，在两种细胞系中克隆后，发现过表达LINC00657的HepG2细胞中克隆显著下降，而在Huh7中敲减LINC00657后，克隆显著升高。 第二：为了探寻LINC00657抑制细胞生长的机制，课题组对两种细胞的细胞周期进行了检测。 结果显示：过表达LINC00657的HepG2细胞中细胞周期大都停滞在G0/G1期，而在G 2 /M 期细胞数量显著下降，而在敲减LINC00657的Huh7细胞中结果恰恰相反。 3 LINC00657 抑制了肝癌细胞的迁移和浸润 第一：在前期观察到LINC00657的表达水平与临床病理中肝细胞癌的浸润和转移相关，因此课题组分别在过表达LINC00657的HepG2细胞和敲减LINC00657的Huh7细胞中检测肝癌细胞的浸润和迁移能力。 结果表明：过表达LINC00657的HepG2细胞中，抑制了细胞的浸润和迁移； 敲减LINC00657的Huh7细胞中，增加了细胞的浸润和迁移。 第二：为了检测在HCC细胞中 LINC00657相关的上皮间质转移相关因子的水平，课题组使用了蛋白技术检测。 结果显示：过表达LINC00657的HepG2细胞中， E-Cadherin 和ZO-1的表达升高；敲减LINC00657的Huh7细胞中N-cadherin 和slug的表达下降。 4 在小鼠体内敲除了LINC00657后促进了肿瘤增长 第一：在BALB/c小鼠中移植了Huh7细胞包括Vector对照组和干扰LINC00657质粒组，结果显示，肿瘤的大小和体积在干扰组中比对照组中较大。 第二：Ki67和TUNNEL染色显示干扰组比对照组癌细胞较多。 5 LINC00657 可与miR-106a-5p直接结合 第一：课题组利用生物信息学的starBase 数据库预测出与lncRNA结合的小RNA miR-106a-5p； 在HepG2 和Huh7细胞中分别干扰LINC00657后，miR-106a-5p 的表达水平与对照组相比显著增高； 课题组分别用了miR-106a-5p 的抑制剂和miR-106a-5p 过表达增强和抑制 LINC00657的表达。
第二：双荧光素酶报告基因验证miR-106a-5p可以和LINC00657的3，UTR区相结合；课题组构建了LINC00657野生型和突变型质粒与miR-106a-5p 过表达的质粒共同转染入HepG2细胞，结果表明LINC00657野生型组细胞活性降低，而突变组细胞活性没有影响。
第三：为更深一步检测LINC00657和miR-106a-5p是否共同存在于RNA干扰的复合体RISC中，课题组在Huh7细胞中采用RNA结合蛋白免疫印迹实验，沉淀出了Ago2蛋白，表明其共同存在RISC中。
第四：课题组检测到HCC细胞系中mir-106a-5p水平比正常组细胞高，同时在组织中，肝癌细胞组织中mir-106a-5p的水平也比正常组织较高。
6 LINC00657 通过与miR-106a-5p结合来促进PTEN的表达水平升高 第一：课题组采用miRanda数据库预测miR-106a-5p的可能结合的靶目标-PTEN。双荧光素酶报告基因验证miR-106a-5p能与mRNA PTEN的3,UTR区相结合。
第二：为了验证LINC00657是一个海绵式与miR-106a-5p竞争性结合，分别在过表达LINC00657的HepG2细胞和敲减LINC00657的Huh7细胞中检测PTEN的水平，结果显示，PTEN的表达水平分别增加和下降。
以上结果表明LINC00657 是通过与miR-106a-5p结合从而释放靶目标PTEN，进而促进PTEN表达水平的增高。
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