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经典染料香豆素，用途广泛的香豆素包括AMCA，7-氨基香豆素（AFC和AMC），7-羟基香豆素和7-甲氧基香豆素的衍生物， 用于制备蓝色荧光肽，蛋白质和其他生物分子。与荧光素，罗丹明和花青素相比，香豆素由于其相对较低的消光系数而产生中等亮度和光稳定性的荧光。 蓝色荧光探针适合用于细胞骨架等高丰度靶标的直接成像，细胞追踪应用，检测酶活性和某些多色荧光应用的底物-包括免疫荧光，核酸和蛋白质微阵列，原位杂交和神经元追踪。 光谱性质 表1. 7-氨基-4-三氟甲基香豆素（AMC）的光谱性质。
图1. AMCA（一种常用的香豆素衍生物）的激发和发射光谱。 iFluor™350-替代物——AMCA和AlexaFluor®350 iFluor™350染料是一种与AMCA光谱相似的亮蓝色荧光染料，具有改善的水溶性，光稳定性和更高的荧光量子产率。iFluor™350偶联物非常适合于高丰度靶标的直接成像，在多色应用（例如流式细胞仪和超分辨率荧光显微镜）中特别有用，而不会影响绿色和红色荧光探针的性能。
图2.将 HeLa细胞固定在4％甲醛中，然后用Phalloidin iFluor™350偶联物和Nuclear Orange™DCS1染色。 表2. iFluor™350——AMCA和AlexaFluor®350的替代产品
香豆素相关产品有哪些？ 包括用于标记肽，蛋白质和其他生物分子的活性染料，缀合物，指示剂和用于检测细胞，匀浆和溶液中酶活性的底物。 1.反应性香豆素染料 反应性荧光香豆素和香豆素衍生物广泛用于共价标记生物分子，例如抗体，碳水化合物，核酸，蛋白质，肽和寡核苷酸。香豆素共轭物可产生适度明亮和光稳定的蓝色荧光，当与绿色，黄色或红色荧光探针结合使用时，通常用作检测酶活性或在彩色荧光研究中提供对比的底物。香豆素和香豆素衍生物很容易在各种染料标记化学中获得，包括： 琥珀酰亚胺酯/ NHS酯-用于标记抗体，蛋白质，肽，胺修饰的寡核苷酸和其他生物分子上的游离胺（-NH？） 马来酰亚胺-用于标记抗体，蛋白质和肽上的巯基 叠氮化物-通过点击化学法标记亚乙基 炔烃-通过点击化学法标记叠氮化物 酰肼-用于标记醛基和酮基 羧酸-用碳二亚胺预活化后标记胺，或用于醇类的Steglich酯化 胺-用于标记各种亲电子化合物，例如活化的酯 表3. 可用的反应性香豆素和香豆素衍生物。
Note：ε= 在其zui大吸收波长处的摩尔消光系数（单位= cm -1 M -1） 2. 香豆素标记的酶底物 香豆素和香豆素衍生物经常用于制备荧光底物，以检测细胞和溶液中的酶活性。当被目的酶水解时，香豆素修饰的底物显示出与酶活性成线性比例的荧光强度增加。AAT Bioquest提供了多种香豆素修饰的底物，可用于检测Caspase，蛋白酶，肽酶，磷酸酶等的活性。 表4. 可用香豆素标记的荧光底物。
3.香豆素标记的缀合物 香豆素标记的结合物因其亮蓝色荧光和出色的光稳定性而在生物成像和生物标记中具有广泛的应用。香豆素衍生物可以标记抗体，链霉亲和素，鬼笔环肽，膜联蛋白v和其他生物分子，以研究细胞凋亡，标记细胞器或通过放大微弱信号来提高测定灵敏度。 表5.可用香豆素标记的缀合物。
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