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非融合双标慢病毒载体系列可以同时表达嘌呤霉素抗性标签和EGFP荧光标签，独立表达非融合的目的基因，减少荧光标签融合对目的基因的影响。载体系列包括U6启动子的shRNA慢病毒RNA干扰载体和CMV、EF1a启动子的慢病毒基因过表达载体。  双标慢病毒载体系列中RNA干扰载体pLVshRNA-EGFP（2A）Puro采用U6启动子表达shRNA。过表达载体有CMV启动子和EF1a启动子两种。CMV启动子是最常用的基因过表达启动子。可以在多数哺乳动物细胞和组织中高效表达目的基因。EF1a启动子来自人类EEF1A基因，是组成性高表达基因启动子，在某些CMV启动子发生沉默的细胞中可以有效表达。 pLV-EGFP-2A和pLV-EF1a-EGFP-2A中EGFP基因和目的基因在同一个启动子驱动下先翻译出融合的蛋白，然后在2A剪切信号作用下切割为两个独立的蛋白，因此EGFP表达量比较地直接代表目的基因的表达量。筛选稳定细胞系的时候可以方便地根据荧光蛋白亮度较为准确地判断出目的蛋白高表达的细胞株。 在pLV-EF1a-EGFP（2A）Puro和pLV- EGFP（2A）Puro，EGFP和puromycin在PGK启动子作用下表达，目的基因在单独的启动子下表达。这两个载体适合表达较大的基因。通常大于2.5kb的基因用这类载体进行过表达稳定细胞株筛选比用pLV-EGFP-2A和pLV-EF1a-EGFP-2A更容易得到高表达细胞株。 |
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