打孔液有很多种,方法也有很多。与你的实验方法相关。我用过酒精固定或Triton X-100(我做的都是培养的细胞): (1)70%的酒精固定24小时即可,不再需要再打孔。如在PI染色测细胞周期或凋亡。 (2)Triton X-100是比较强烈的穿孔剂。0.1% Triton X-100/PBS(再加0.1%BSA) 是比较温和一点。浓度可适当提高。作用时间以几分钟为宜。这个时间必须要自己试。时间长了细胞易破裂,短了则打孔不够。如果你要染胞浆,则时间适当短些,如果要染内质网或核内等,由于要对两层膜性结构打孔,时间当然会长一些。 (3)可以试试0.1% saponin(皂素) |
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