【原】酶联免疫吸附实验基本原理

971年瑞典学者Engvail和Perlmann,荷兰学者VanWeerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，即酶联免疫吸附测定法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay, ELISA)。

酶联免疫吸附（ELISA）用于：

（1）免疫酶染色各种细胞内成份的定位；

（2）研究抗酶抗体的合成；

（3）显现微量的免疫沉淀反应；

（4）定量检测体液中抗原或抗体成份。

优点：快速、灵敏、定性、定量、定位

实验原理

1.包被：抗原/抗体，固相化

2.反应： 1)待测抗体/抗原； 2)酶标抗原/抗体

3.洗涤：使结合在固相上的抗原抗体复合物与未结合的分离

4.底物显色：定性/定量分析

常用的酶与底物：

酶	底物	显色	测定波长
辣根过氧化物酶	邻苯二胺（OPD）	橘红色	492nm
辣根过氧化物酶	四甲基联苯胺（TMB）	黄色	450nm
碱性磷酸酶	4-硝基酚磷酸盐(p-NPP)	黄色	405nm

终止液：2mol/L  H2SO4