过碘酸Schiff反应(PAS) ⑴石蜡切片6~8微米。 ⑵切片脱蜡下行水。 对照:另一取含糖原切片在淀粉酶液1小时(37℃),水洗。 淀粉酶1克,蒸馏水100毫升 ⑶1%过碘酸(高碘酸)水溶液2~5分钟,蒸馏水洗数次。 ⑷Schiff试剂处理8~10分钟,流水冲洗5~10分钟。 Schiff试剂:煮沸蒸馏水200毫升,停火,加碱性品红1克,不停搅拌溶解。冷至50℃,加入1N盐酸20毫升,冷至室温(25℃),加偏重亚硫酸钠或钾1克,摇荡,暗处过夜。 加活性碳2克,充分摇荡数分钟,过滤,滤液呈无色或淡黄色,盛入棕色瓶内,4℃冰箱保存。 ⑸苏木精浦核,水洗。 ⑹脱水 ,透明,封片。 结果:糖原及其它PAS阳性物质呈品红色,淀粉酶处理的切片无色。 Schiff块染显示脱氧核糖核酸(DNA) ⑴取大白鼠肝固定于Carnoy液或Helly液18小时(4℃)。Helly 液可有少许沉淀物。 ⑵1N盐酸水解90~120分钟,换新液。移于55℃温箱水解55分钟。 ⑶亚硫酸水溶液13~20分钟。 亚硫酸水:10%无水亚硫酸钠水溶液10毫升,自来水200毫升,1N盐酸溶液10毫升 ⑷入Schiff试剂4~5小时。 ⑸亚硫酸水溶液洗16~18小时。 ⑹70%酒精、80%酒精各2~3小时。95%酒精2小时。无水酒精2次共1小时。 ⑺二甲苯透明,石蜡包埋,切片4~6微米。 ⑻切片脱蜡,二甲苯透明,中性树胶封片。 结果:细胞核内DNA红色。 对照片:不经1N盐酸水解,直接入⑶~⑹处理,结果阴性。 核仁染呈红色(含合成rRNA的DNA)。 血细胞多糖高碘酸-Schiff法 ⑴血液或骨髓涂片用苦味酸无水酒精饱和液或Carnoy液固定3~5分钟; ⑵用0.5%高碘酸饱和水溶液氧化5~10分钟; ⑶入Schiff试剂(0.1%碱性品红配制)染色30~60分钟; ⑷最后用2%甲基绿水溶液复染细胞核。 皮肤-S-S-基过甲酸-Schiff显示法 ⑴皮肤固定于10%甲醛液48小时以上至半年甚至更长;Bouin 液固定24小时。 ⑵冰冻切片25微米。 ⑶蒸馏水洗一次。 ⑷过甲酸液处理10~20分钟,水洗2~5分钟。 过甲酸液:98%或85%甲酸40毫升,30%过氧化氢4毫升,浓硫酸0.5毫升。至少存放1小时再用。不超过24小时。保存于冰箱内,越新鲜越好。 ⑸浸入Schiff试剂30~60分钟。 ⑹自来水加热至60℃洗5~6分钟 ,每隔3分钟换一次液。(洗涤不充分易褪色) ⑺将切片贴于盖玻片上,晾干。 ⑻脱水,透明,封片。 结果:皮肤角质层呈红色;毛发(含胱氨酸较多)呈深红色。 |
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