软骨组织软骨是以支持作用为主的结缔组织。软骨内不含血管和淋巴管,软骨组织由软骨细胞和软骨基质构成, 软骨基质是软骨细胞的细胞外基质,根据软骨基质内含纤维的不同,可将软骨组织分为透明软骨、弹性软骨、纤维软骨3种。 透明软骨分布较广,主要分布于关节软骨、肋软骨等。软骨基质由无定形基质和包埋在基质内的胶原原纤维构成,无定型基质中主要含3种糖胺聚糖:聚透明质酸、硫酸软骨素、硫酸角质素。透明软骨中的纤维是由II型胶原蛋白组成的胶原原纤维,含量约占软骨干重的40%,此外,在基质中还含有少量其他胶原蛋白,如VI、IX、X、XI型胶原。软骨基质中的小腔为软骨陷窝,软骨细胞即位于此陷窝内,软骨细胞周基质中含VI型胶原蛋白组成的细网丝。 纤维软骨分布于椎间盘、关节盘及耻骨联合等处。基质内富含胶原纤维束,呈平行或交错排列,化学成分为I型胶原蛋白,也含不等量II型胶原原纤维,无定型基质很少,其中以多功能蛋白聚糖为主。软骨细胞较小而少,成行排列于胶原纤维束之间。 弹性软骨分布于耳廓及会厌等处。结构类似透明软骨,仅在间质中含有大量交织成网的弹性纤维,胶原纤维较少,具有较强弹性。 综上,软骨基质中主要为胶原蛋白,因此,解离过程中,选择胶原酶进行解离。胶原酶提供广泛的蛋白水解活性,能够降解天然胶原和网状纤维,且优先切割细胞膜外的蛋白,基本上可保持细胞完整。 材料和试剂耗材1、试剂、仪器耗材2、酶溶液配制在标准培养基中配制胶原酶溶液 (1mg/mL),使其溶解并通过0.45μm和0.2μm注射器过滤器进行无菌过滤。0.45μm过滤步骤对于实现高效过滤至关重要。 胶原酶混合物可以新鲜使用或立即冷冻,制备后最多可使用6个月。分装储存,因为冻融循环会失去活性。 实验流程
如有较多红细胞,则需再做裂解红细胞处理:
结果展示所获细胞悬液:活率大于97 %,结团率低,背景干净。 |
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