今天小编为大家介绍下细胞的几种不同运输收货后的处理方法: 一、 T25培养瓶细胞(常温运送) 请在收到细胞后,先检查培养瓶是否完好,培养液是否外渗,培养液是否浑浊,并核对瓶身上的标签信息,细胞数量是否与发货清单一致。如有异常情况,请及时与我们联系。 用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面,先不要打开培养瓶,将细胞置于细胞培养箱内静置1-2 h,待细胞恢复基本生长状态后,再进行后续操作。 显微镜下观察细胞状态,观察细胞时请拍100×、200×各2-3张照片进行留存,所拍照片应该尽量清晰。 若细胞密度低于80%,可在原瓶中留5 mL培养基继续培养,若细胞密度大于80%,可进行传代。 培养瓶运输的培养液不能重复使用,请及时更换新鲜培养液培养。 部分贴壁细胞在运输过程中可能会有部分脱落,如发现有脱落,可收集培养液离心后再接种到新的培养器皿。 二、 冻存管细胞(干冰运送) 请在收到细胞后,先检查包装是否完整,干冰是否充足,冻存管有无破损等情况,并核对细胞管上的标签信息,细胞管数是否与发货清单一致。如有异常情况,请及时与我们联系。 低温保存的细胞非常脆弱,收到的细胞如24h内复苏,可存放于-80℃冰箱;超过24h请存放于液氮中。建议收到细胞冻存管检查无误后,详细阅读细胞说明书,尽快复苏。 复苏细胞后首次换液之前显微镜下观察细胞状态,观察细胞时请拍100×、200×各2-3张照片进行留存,所拍照片应该尽量清晰。 部分细胞贴壁时间较长,不建议复苏当天换液,若复苏有异常,请及时跟我们联系。 三、 血清管细胞(常温运送) 请在收到细胞后,先检查包装是否完整,有无破损漏液的情况,并核对细胞管上的标签信息,细胞管数是否与发货清单一致。如有异常情况,请及时与我们联系。 收到细胞后请尽快进行处理,如不能及时处理,请将细胞放至常温环境,通常15-25℃为佳,并尽量在24 h内完成实验。否则细胞状态和存活率将会受到一定的影响。血清管悬液可能会呈现一定程度的浑浊状态,这属于正常现象,请放心操作。 将血清管外壁进行常规消毒后,在超净台内小心开盖,尽量避免气泡溢出,轻柔吹打数次,转移至15 mL离心管内。 吸取1 mL培养基清洗血清管内壁,同样转移至15mL管,并吹打均匀。 取20 μL细胞悬液至EP管,台盼蓝染色并计数,记录细胞数量和存活率。如有异常请及时与我们联系。 250 g离心4 min,收集细胞沉淀,并接种至合适大小的培养器皿中,放置于培养箱内进行培养。 24 h后显微镜下观察细胞状态,观察细胞时请拍100×、200×各2-3张照片进行留存,所拍照片应该尽量清晰。,并根据汇合度继续培养或消化传代。 四、 细胞胶囊技术 “细胞胶囊“是由某生物自主研发的一种细胞常温运输技术,这种技术只需普通试管和培养液便可储存及携带大部分种类的细胞,并在一周的运输时间内保持细胞活性高,不成团,适用温度范围为10℃至37℃。 “细胞胶囊”包括细胞管和溶解Buffer共2个试剂管。请在收到细胞后,先检查“细胞胶囊”管身是否完好,培养液是否外渗,并核对管身上的标签信息,细胞信息是否与发货清单一致。如有异常情况,请及时与我们联系。 收到“细胞胶囊”后请尽快进行实验,如不能及时处理,请将细胞放至常温环境,通常15~25℃为佳,并尽量在24 h内完成实验。“细胞胶囊”管内的培养液肉眼观察可能会呈现一定程度的浑浊状态,这属于正常现象,请放心操作。 用75%酒精消毒试剂管表面,在超净台内小心的打开细胞胶囊管盖,尽量避免气泡溢出。 使用移液枪吸取细胞胶囊管中的液体,全部弃去。 将Buffer全部加入到细胞胶囊管中,拧紧管盖,上下颠倒3-5 min。 观察到细胞胶囊完全溶解后,小心开盖,使用移液枪轻柔吹打数次,转移到15 mL离心管内。 250 g离心4 min。 离心后收集细胞沉淀,加入完全培养基重悬后,将细胞悬液接种到合适大小的培养器皿中,放置于培养箱中进行培养。 24 h后显微镜下观察细胞状态并拍照。建议留存100×、200×照片各2~3张。如有异常请及时与我们联系。 10. 后续根据细胞汇合度继续培养或消化传代。 注意事项 建议细胞靠前代次保种。首次传代时细胞离心后收集到的细胞较多时可以少量冻存保种。 部分细胞培养需要提前包被培养瓶,具体请详细阅读说明书后进行操作。 |
|
来自: 生物学渣 > 《干货分享/行业资讯》