肌动蛋白（牛心脏 muscle）生物活性测定

肌动蛋白（牛心脏 muscle）采用Pardee和Spudich法从牛心肌中纯化肌动蛋白。牛心脏肌动蛋白由84%的α心脏肌动蛋白和16%的α骨骼肌动蛋白亚型组成，分子量约为43 kDa。牛心脏肌动蛋白纯度大于99%，以白色冻干粉末的形式提供。

肌动蛋白（牛心脏 muscle）存储和重建：

短暂离心以收集管底部的产品。冻干蛋白质在4°C条件下干燥至<10%湿度时，可稳定储存6个月。应使用100µl蒸馏水将蛋白质重组至10 mg/ml。然后将蛋白质置于以下缓冲液中：5 mM Tris-HCl pH 8.0、0.2 mM CaCl2、0.2 mM ATP、5%（w/v）蔗糖和1%（w/v）葡聚糖。然后将浓缩的蛋白质等分为实验量，在液氮中快速冷冻，并在-70°C下储存。如果在-70°C下储存，蛋白质可稳定6个月。对于工作浓度，应使用添加0.2 mM ATP（Cat.#BSA01，见试剂清单）和0.5 mM DTT的通用肌动蛋白缓冲液（Cat.#BSA04）进一步稀释蛋白质。肌肉肌动蛋白是一种不稳定的蛋白质，应小心处理。避免重复冻融循环。

蛋白质纯度通过12%聚丙烯酰胺凝胶上考马斯蓝染色蛋白质的扫描密度测定来确定。发现心脏肌动蛋白的纯度>99%（见图1）。

图1：心脏肌动蛋白纯度测定。在12%SDS-PAGE系统中通过电泳分离100µg牛心脏肌动蛋白样品（分子量约43 kDa），并用考马斯蓝染色。用精密红色蛋白质分析试剂（Cat.#ADV02）测定蛋白质定量。Mark12分子量标记来自Invitrogen。

肌动蛋白（牛心脏 muscle）生物活性测定：

心脏肌动蛋白的生物活性可以通过其在体外有效聚合成细丝并在降速分析中与未聚合成分分离的能力来确定。严格的质量控制确保在该试验中，90%以上的肌肉肌动蛋白可以聚合。

关于心脏肌动蛋白的建议：

1.在缺乏ATP、二价阳离子和二硫苏糖醇（DTT）的情况下，单体肌动蛋白不稳定

2.单体肌动蛋白将在>2 mM K+、Na+、和>0.05毫米Mg2+。

3.单体肌动蛋白在pH值低于6.5或高于pH值8.5时不稳定。

4.聚合肌动蛋白比单体肌动蛋白更能抵抗不利条件。因此，肌动蛋白最好以聚合形式在4°C下储存数周。如果薄膜的储存时间超过24小时，建议添加抗菌剂，如0.05%叠氮化钠或100 ug/ml氨苄西林和10µg/ml氯霉素。

5.将肌动蛋白在液氮中以10毫克/毫升的速度快速冷冻，以保持6个月的高生物活性。