|
我们通常讲的柱层析一般是指正相柱层析【柱层析技术详解】，柱子的填料是硅胶。硅胶表面有很多-SiOH基团，因此对于大极性的化合物的吸附能力较强，柱层析洗脱时，硅胶对小极性的化合物吸附能力较弱，所以先被洗脱下来。对于一些极性超大的化合物，硅胶的吸附能力太强以至于用常用的溶剂无法洗脱下来，无法用正相柱层析进行纯化。这种情况下就要考虑进行反相柱层析，反相柱层析最常用的填料是C18反相硅胶填料，这类反相硅胶是利用C18烷基硅烷将硅胶的-SiOH基团封住，形成了很多C18键合微孔，对于小极性的化合物吸附能强，相反对大极性的化合物的吸附能力弱，因此和正相硅胶的洗脱顺序相反，因此称为反相硅胶。我们在进行反相柱层析时，梯度洗脱开始以大比例极性水溶液开始，由于C18反相硅胶填料表面疏水性，疏水官能团就会发生蜷缩，因此使用前需要用极性有机溶剂活化（疏水官能团得以舒展），再过渡到水溶剂（保持其吸附活性）。活化平衡的步骤必不可少，否则会明显影响分离效率。实验室中我们通常使用过柱机进行反相柱层析，但是如果没有过柱机，可以像正相一样手动柱层析吗？当然是可以的。区别就是C18填料有点贵，需要重复利用，别像普通硅胶一样过完直接扔掉了。下面小编分享一下加利福尼亚大学圣塔芭芭拉分校的C18反相柱层析标准操作。
|
