谈一谈关于企业校准品的溯源

上次关于重组抗原能否完全替代样本中的标志物的问题，我说的确实不是很准确，因为我没有把溯源加进来，只是片面地拿重组抗原和血清标志物互相比较，其实，只要有溯源链在里面，两者是可以达到等价转换的。

下面我讲一讲什么是溯源。通俗的讲，就是用一个公认的标准去给你的东西校准。比如我用校准砝码去给现在手头有的一个天平去校准。校准品的溯源是类似的，就是我要把手头有的检测物质的浓度校准到一个公信程度。

校准品的溯源有三个关键的过程：

1、溯源链的建立，也就是说你想把谁当标杆；

2、不确定度的计算，每个校准品的校准过程都会引入偏差，不确定度就是为了表示你的这个溯源过程最终引入的偏差的大小；

3、基质效应与互通性，就是你的校准品能不能真实的代替血清。

这里涉及三个文件：

1）《GBT 21415-2008 体外诊断医疗器械生物样品中量的测量 校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》

2）《YYT 1709-2020 体外诊断试剂用校准物测量不确定度评定》

3）《WS/T 356-2011 基质效应与互通性评估指南》

它们已经把溯源的类型、不确定度的计算、基质效应与方法学的互通性评价说的很清楚，但是我估计很多人不想看，也可能看的一知半解，我想以举例的形式说明一下。

我们首先要知道的是，你所做的项目，有没有可以追溯的标准。

对于有国际或者国家标准品的项目，我们要将其溯源到国际和国家标准品，因为当有一个比较公认的标准，每个厂家做的试剂才具有可比性。对于有国家标准品的，我们首先要溯源到国家标准品，药监局是这么规定的，你注册的时候比较好通过。国际标准品制备的组织机构有很多，详见图片。

国内一般是中国食品药品检定研究院和中国计量科学研究院负责这方面，做研发的同学在开发一个试剂之前首先要关注有没有国际或者国家标准品。

当然对于一些项目，目前国际或者国家都暂未开发出标准品，对于这样的项目，你只能溯源到目前已有产品注册证的厂家，但是我这里想说的是，你最好溯源到这个指标的金标准厂家。什么是该指标的金标准厂家？就是第一个吃螃蟹的人。为什么要溯源到他们家？因为他们家是第一家做的，他们在临床上已经有了很好的积淀，比如正常人群的参考范围，正常人群与病患的cutoff截点，他们进行的所有数据的总结都是以该物质作为标准品进行的，你不用管他这个标准品是怎么来的，具体是什么，你只要是后来者，而且想依赖他们的临床成果，你最好得溯源到他那里。如果你想说，我这里有一个更接近真实标志物的重组抗原，实话告诉你，那也没用，如果你想剽窃人家的临床数据，你就得乖乖的按人家的溯源，除非你有钱，自己去搞临床。

还有一些项目是比较罕见的，创新的，你都找不到可以溯源的东西，那恭喜你，你就是那个第一个吃螃蟹的人，一切的标准你都可以自己定义，只要把临床的资金备好就行了，药监局还非常鼓励这种产品，没准能走个绿色通道。等拿到注册证，你们家就是金标准了。

在这里我想以常见的炎性标志物CRP为例阐述一下具体的溯源过程（溯源链条下图）。

CRP有国际一级标准品（85/506），假如我们做的是荧光层析的全量程CRP（0.5-200ug/mL），那么我们可以如下溯源：

1、稀释国际标准品。

85/506的每瓶装量50ug，是由500uL的人血清冻干而成的。我们可以先用250uL稀释液复溶，此时的浓度是200ug/mL，然后用稀释液依次再配制100、50、20、10、5、1、0.5、0浓度点。这里说一下稀释液的事，理论上应该用CRP free血清当稀释液最恰当，但是由于血清买卖受限加上CRP free血清的制备和验证问题，我们一般采用10%的牛血清磷酸盐溶液代替，后续再验证基质效应。

2、校正企业选定测量程序。

假如我们选择的厂家是同样方法学的万孚试纸，那么就将稀释好的系列国际标准品进行检测，一般每个点重复测试3-5次求均值，然后根据浓度-浓度曲线去给万孚的试纸条做校正。

3、企业工作校准品的配制和赋值。

一般我们会选择一个市面在售的CRP抗原作为配制原材料，比如我们用海肽的或者华美等厂家的CRP抗原，买回来以后适当的稀释以后分装冻存于-80℃，即用即取，不得反复冻融使用。我们取其中一支将其稀释至一个浓度，如50ug/mL，将稀释后的该样品用校正后的万孚的试剂去测试，重复3-5次，计算出目前工作校准品的原始浓度。我们根据这个浓度，稀释出200、100、50、20、10、5、1、0.5、0系列浓度的工作校准品，然后再用校正后的万孚试纸条去给各个浓度点定值，作为工作校准品的浓度值。

4、企业常设测量程序的校正。

采用系列工作校准品对我们自身的试剂和仪器进行测试，拟合出浓度-T/C曲线，通常可以校正2-3台仪器。

5、企业产品校准品的配制和赋值。

参照工作校准品的配制方法，配制系列的产品校准品，用校正过的自己的仪器2-3台去测试每个产品校准品，重复测定10次剔除离群值求均值，作为产品校准品的浓度值。

关于不确定度的计算：

产品校准品的不确定度主要由不均匀性、稳定性、赋值过程引入的。不均匀性主要是指的瓶间差，稳定性大家都清楚，赋值过程主要是上一级校准品的不确定度、测试的CV、仪器台间差等引入的，行标里已经给了详细的计算范例，我不多说。

关于基质效应和互通性的计算：

行标里已经讲了具体的算法，我只讲一讲行标里各个概念与咱们案例的对应关系。一般至少取20例临床样本和咱们的产品校准品，用企业常设测量程序作为比对方法（X轴），以用户常规测量程序作为评估方法（Y轴），计算X值对应的Y值的95%的置信区间，以此来评价校准品和临床样本有无基质效应，以及公司仪器和客户手里仪器的互通性。

至此呢，溯源也就结束了，不知道你们有收获吗？

• 德国维润赛润可用于参考品、质控品、校准品、对照品的原料清单
  

编辑：Jason | 校对：Harris | 责编：Hillson

 

                     

公司简介

德国维润赛润（Institut Virion\Serion GmbH）成立于1978年，是国际知名的诊断产业原料生产商和供应商。公司的研发和生产基地位于德国维尔茨堡，已通过DIN EN ISO 13485质量体系认证，拥有三级生物安全实验室(P3实验室)。经过了40余年的发展，公司构建了丰富的生物原料产品线，主要包括天然抗原、重组抗原、人源化单克隆抗体和磁珠等。