可道网【talkdao】关于阴虚体质基础研究论述——阴虚体质的实验研究

 可道网【talkdao】关于阴虚体质基础研究论述——阴虚体质的实验研究
                 可道网
(一）阴虚质内分泌及免疫功能变化
        课题组按照阴虚质、阳虚质及平和质判定标准，筛选60例阳虚质、60例阴虚质和50例平和质，清晨8:00 ~9:00空腹抽取静脉血,采用ELISA法测定三组血清皮质酮、皮质醇、促肾上腺皮质激素、环磷酸腺苷、环磷酸鸟苷、游离三碘甲状腺原氨酸、游离甲状腺素、促甲状腺素、白细 胞介素1β和白细胞介素2水平,计算cAMP/cGMP比值,并对三组的上述指标之间的差异进行分析。结果如下：
        (1)与平和质比较，阴虚质血清FT，显著上升，血清皮质醇、ACTH、cGMP及FT显著下降； 阴虚质与阳虚质比较，血清皮质醇显著上升，血清皮质酮、cAMP显著下降。阴虚质血清皮质醇 和ACTH显著降低，血清皮质酮稍微升高，说明阴虚质者下丘脑-垂体-肾上腺轴功能有所紊乱,机体抵抗力和应激能力有下降的趋势，可能与阴虚质者平素阴亏内耗的特征有关。阳虚质血 清皮质醇比阴虚质显著降低，说明阳虚质者的机体抵抗力和应激能力均比阴虚质者低，也与中 医理论与实践相符。
        (2)阴虚质血清cGMP显著下降，而cAMP水平有所下降(P 〉0.05)。cAMP/cGMP比值有所 升高(P 〉0.05)，与既往研究结果的趋势相似，至于(P 〉0.05)，其原因可能与本研究的阴虚质受试对象为无病之人有关。阴虚质血清FT，水平显著下降，而FT水平显显著升高，TSH水平稍微升高。说明阴虚质者下丘脑-垂体-甲状腺轴功能紊乱。阴虚质者“内热”的诸多表现可能与血清FT水平显著升高有关，但鉴于血清FT。水平显著下降，故不能得出阴虚质与甲状腺功能亢进相关的结论,尚需进行进一步的研究。阴虚质血清的FT3、FT4与阳虚质比较，无显著性差异，仅呈现升高趋势。
        (3)阴虚质血清正LL-1β水平与平和质比较有所升高，而与阳虚质比较稍微降低；阴虚质血清 LL-2水平与平和质比较有所下降，而与阳虚质比较稍微升高，提示阴虚质存在免疫功能紊乱的倾向，这可能与其内源性致病因素的调节能力障碍有关。至于LL-1β和凡LL-2水平有升有降，因其P 值均大于0.05，并无显著性差异，故是否阴虚质者比阳虚体质者更容易发生炎症反应尚不得而知，还需进一步深人研究。
         (4)许健阳等发现，“阴虚”组大鼠基础痛阈较正常空白对照组低。电针可抑制创伤痛 诱导的肾上腺Fos/Jun蛋白、下丘脑Fos蛋白的表达、增加下丘脑前脑啡肽mRNA的表达，其镇痛作用具有明显的昼夜节律性;“阴虚”则在酉子时（“阳虚”大鼠电针镇痛的最佳时机在卯午时，两者呈相互对应性）。

(二）阴虚体质的外周血基因表达谱研究
        课题组在流行病学调査的基础上，按照阴虚质及平和质判定标准，筛选8例阴虚质和6 例平和质，取受试者的外周血，采用Affymetrix Gene Human GenomeU133+2.0芯片，检测阴虚体质和平和体质的基因表达谱,并对差异表达基因的生物学功能进行评价。结果：当q-value(%)<5%并且Fold Change>2或<1/2时，阴虚质与平和质表达差异基因共1 142个位点，其中上调基因645个位点，下调基因497个位点。当q-value(%)<5%并且Fold Change>3或<1/3时，阴虚质与平和质表达差异基因共有275个位点，其中上调基因232个位点，下调基因43个位 点。当q-value(%)<5%并且Fold>4或〈1/4时，阴虚质与平和质表达差异基因共有 107个位点，其中上调基因100个位点，下调基因7个位点（图9-3-1〉。



        对差异表达基因进行GO注释,并利用KEGG、BioCarta和GenMAPP pathway 分析。1 I42个差异表达基因位点进行GO注释，共涉及225种生物学功能。其中P〈0.05且q〈0.05，有显著差异的766个，涉及生物学功能共116种。
        1 142个差异表达基因位点中有192个可进行KEGG pathway分析，涉及84条通路。其中p〈0.05且q0. 05，有显著差异的有94个，涉及22条通路“
        1 142个差异表达基因位点中有1045个可进行genmapp pathway 分析，涉及26条通路。其中p〈0.05且q〈0.05，有显著差异的有583个，涉及87条通路。
1142个差异表达基因位点中有145个可进行bioCarta pathway分析，涉及108条通路。目其中 p〈05且q〈 0.05，有显著差异的有62个，涉及30条通路.
        所涉及的差异表达基因按其表达状态（上调或下调〉进行归类，共有366个基因位点涉及生物学功能。其中表达上调的基因有拟249个位点，下调基因有177个位点。取p<0.05且q <0.05，共有298个位点有显著差异，其中上调基因有210个位点，下调基因有88个位点。
         总结上调基因和下调基因的生物学功能发现，阴虚体质者炎症相关细胞因子基因表达上 调，发生炎症反应较平和体质者为多，这可能与阴虚质者“内热”的诸多表现〖如手脚心发热、身 体：脸上发热、手脚心出汗、面部两颧潮红或偏红、口干咽燥、眼睛干涩等〉密切相关。另一方面， 阴虚质者存在参与蛋白质、糖腊、三酰基甘油、泛酸和辅酶A、聚糖结构、二萜类化合物、氨酰转移核糖核酸生物合成的基因表达上调，以及参与胆汁酸、白细胞三烯、花生四烯酸、烟酸盐和烟酰胺、脂肪酸、精氨酸和脯氨酸代谢的基因表达上调，说明阴虚质者的生物合成与代谢功能有增强 的趋势；阴虚质者的部分与转录、翻译相关的基因表达下调，提示了阴虚质在遗传信息传递方面 的能力可能呈现下降状态；而部分与生长发育相关的基因表达下调，以及与金属肽酶、三磷腺昔酶、糜蛋白酶、连接酶、小鸟苷三磷酸酶活性相关的基因表达下调，又揭示了阴虚质者可能有生长 发育下降趋势。

(三）阴虚质代谢组学研究
        课题组运用、H-NMR技术,采用美国瓦里安公司（Varian,lnc)INOVA600MHz超导核磁共振谱仪，比较分析阴虚体质和平和体质血液和尿液的代谢组学特征，寻找生物标志物。并对阴 虚体质和胃阴亏虚证的代谢组学特征进行比较，揭示体质与相关证候的代谢组学差异。

1.阴虚体质代谢组学特征及其与平和体质的比较
        具体实验方法见第七章第三节。
        研究结果发现，阴虚质尿液中的标志物有：肌酐〔creatinine.83.06.4.06.4.1〕、二甲胺 (DMA., 82.70)、柠檬酸（citrate，82.58，2.66)、甘氨酸（glyetate，83.54.）、葡萄糖(；glucose，83.-4) , 血液中的标志物有：脂类(lipid.80.80-0.90),乳酸（lactate，81 31-1. 33,4 .10-4. 12》、 丙氨酸（alanine，81.48,1.49〉、葡萄糖（ghucose，83. 20-4 00〉、极低密度脂蛋白/低密度脂蛋白(VLDL/LDL，80.9.1. 3，1. 34，1. 26〕、N-乙酰糖蛋白(NAc,82.01-2.07〉、不饱和脂肪酸(UFA，85.25-5.35) .
        与平和体质相比,阴虚质尿液中肌酐、二甲胺、柠檬酸含量降低，甘氨酸、葡萄糖含量增多，血液中脂类、乳酸、丙氨酸、葡萄糖、极低密度脂蛋白/低密度脂蛋白、N-乙酰糖蛋白、不饱和脂肪酸含量降低。
         实验结果：
        (1)阴虚体质尿液NMR尺实验结果
        1)阴虚质尿液样品的典型1H-NMR只谱图：见图9-3-2，图9-3-3。
        2)阴虚质、平和质尿液样品的1H-NMR谱OSC-PLS分析结果：阴虚质、平和质两组可被图中所示绿线大致分开，与绿线垂直方向代异，与绿线平行方向代表组内差异〔图9-34)


        在组间差异方向上，距离中心越远 的点对差异的贡献度越大。同时结合原始谱图可以看出，阴虚质组尿液中肌酐（creatinine,&3.06，4.06)浓度显著 低于平和质组；二甲胺（DMA，&2.70），柠檬酸〈citrate，82, 58，2. 66 )，氧化三甲胺（TMAO，&3.26〕浓度低于平和质组；甘氨酸〔glycine&3，54〕，葡萄糖 (glucose,？&3-4)浓度高于平和质组（图9-3-5）


 
        (2）阴虚体质血液NMR实验结果
        1)阴虚质血液样品CPMG实验和LED实验的典型氢谱〔图9-3-6，图9-3-7〉

        2)阴虚质、平和质两组血浆样品CPMG实验的1N-NMR谱OSC-PLS分析结果
        阴虚质、平和质两组可被图中所示绿线大致分开。与绿线垂直方向代表组间差异,与绿线平行方向代表组内差异〔图9-3-8)。
        在组间差异方向上，距离中心越远的点对差 异的贡献度越大。同时结合原始谱图可以看出， 阴虚质组血浆中乳酸（lactate，&1.33,1.35), 丙氨酸（alanine，& 1.48〉，葡萄糖（glucose，&3 . 20-4.00），脂类化合物（lipid，&1..27〉浓度低于平和质组，其中对脂类浓度的影响主要来源于脂肪酸链中的CH2基团（图9-3-9〕。

 

        3)阴虚质、平和质两组血浆样品LED 实验的1 H-NMR谱OSC-PLS 分析结果
        阴虚质、平和质两组可被图中所示绿线大致分开，但有交叉与重叠。与绿线垂直方向代表组间差异，与绿线平行方向代表组内差异（图9-3-10)。
        在组间差异方向上，距离中心越远的点 对差异的贡献度越大。同时结合原始谱图可以看出，阴虚质组血浆中极低密度脂蛋 白/低密度脂蛋白(VLDL/LDL， &0. 9 ， 1. 3， 1.26),高密度脂蛋白〔HDL，&0. 86〉，不饱和脂肪酸(UFA,&5.3,5.34 ），N-乙酰糖蛋白(N-acetyl glycoproteins，&2, 02，2. 06)浓度低于平和质组；脂类化合物（lipid，&1.46)浓度高于平和质组（图9-3-11)。

2.阴虚体质与胃阴亏虚证的代谢组学比较
本课题组新近所做的一项研究对阴虚体质和胃阴亏虚证进行了代谢组学比较。结果发现，与阴虚体质相比，胃阴亏虚证组血浆中乳酸（lac,&1.32,1.33)，低密度脂蛋白(LDL,&0.89,5.35)、谷氨酰胺（Gln,&2.45.46)饱和脂肪酸(FA,&2.22)、不饱和脂肪酸（UFA，&5.3,5.34）的含量均相对下降；而丙氨酸（Ala.&1.46-1.48)、胆碱（cho,&3.22)、甘油酰磷脂酰胆碱（GPC,&3.26)、丙酮（acetone,&2.22）、葡萄糖（giucose,&3.4-3.7）、甘氨酞（Gly，&3.54〕高密度（HDL,&0.86 〕，极低密度脂蛋白（VLDL，&0.94，1.38,&1.344)、N-乙酰糖蛋白（Nac，&2.02 )、磷脂酰胆碱（Ptd，&3.22〕的含量相对升高。

        与阴虚体质相比，胃阴亏虚证组尿液中乳酸（&1.34，4.14,4.18),柠檬酸（&2.54,2.66,2.70）2-铜二酸（&3.06,2.46）、肌軒（creatinine,&3.06,4.06）、氧化三甲（&2.49)、甘氨酸（glycine,&3.58)的含量相对升高；而丙铜酸盐（&2.38）、三甲氨（&2.94）的含量相对降两低。
        胃阴亏虚证与阴虚体质相比,乳酸的含量相对下降，说明胃阴巧虚证较阴虚体质产目减少。阴虚体质者糖酵解的速度快，胃阴亏虚证是阴虚体质的渐进。胃阴亏虚证尿液中乳酸的含量高于阴虚体质，说明胃阴亏虚证氧含量下降，处想机体吸人氧的能力下降。可推测已病状态下的证侯较非病状态下的体质能量代谢水平相对低下，随着无氧代谢的加重，乳酸盐不断增加，丙酮酸盐则下降。量棚虚体质下降，这与各组间尿液中乳酸含量变化相符合。
        胃阴亏虚证与阴虚体质相比，低密度脂蛋白含量相对下降，而高密度脂蛋白、极低密度脂蛋白的含量相对升高。低密度脂蛋白含量相对偏低说明摄入脂肪过低，饮食存在不合理，或肝脏代谢异常导致低密度脂蛋白合成障碍碍。VLDL是运输内源性甘油三酯的主要形式。正常人VLDL代谢转化为LDL。一旦极低密度脂蛋白水平明显增高时血浆中除甘油三酯升高外，胆固醇水平也随之增高。因此可以推断证侯组比体质组更容易出现脂代谢异常。胃阴亏虚证与阴虚体质相比，血浆中不饱和脂肪酸含量下降。说明证侯组较体质组脂代谢异常程度更为明显，证侯组更容易出现免疫力低下的情况。
        胃阴亏虚证与阴虚体质相比，血浆中葡萄糖的含量也相对升高，说明证侯组糖代谢水平偏高，机体释放的能量多，也可以从另外一个角度认为证侯组机体为维持正常的代谢平衡，所需要释放的能量多，所以需要加强机体的糖代谢。但是由于糖代谢的途径较多，而且三羧酞循环是糖类，脂类和蛋白质分解代谢的共同途径，是代谢联系的枢纽，其中间产物会被其他代谢消耗，所以很难仅仅从一个方面去解释代谢产物中葡萄糖含量的变化。 只能初步分析认为证侯组较体
质组更容易出现糖代谢的异常，并伴随脂代谢、能量代谢的变化。
        胃阴亏虚证与阴虚体质相比，血浆中谷氨酰酸的含量也是相对减少的。说明证候组与体质组相比，机体内的氮源相对缺乏，机体免疫功能下降。兴奋性概递质减少，与“虚证”表现相一致。并推测证候组较体质组氨基酸代谢、蛋白质代谢异常表现更为明显。