细胞攻略|THP-1(人单核细胞白血病细胞)细胞培养教程

武汉尚恩生物 2023-07-21 发布于湖北

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细胞基本信息

细胞名称：THP-1(人单核细胞白血病细胞)

细胞别称：THP1; THP 1; THPI; THP-1(ATCC); Tohoku Hospital Pediatrics-1

细胞货号: SNL-044

生长特性: 悬浮

培养条件: 1640+10%FBS+0.05mM β-mercaptoethanol+1% P/S

培养环境: 空气，95%；二氧化碳 (CO2)，5%

细胞简介：THP-1细胞从一名1岁的患有急性单核细胞性白血病的男孩的外周血中分离建立，细胞可以吞噬乳胶颗粒和激活的红细胞，细胞膜和胞浆内均没有免疫球蛋白，表达C3R和FcR。THP-1细胞可受佛波酯、TPA诱导向单核系方向分化。THP-1细胞可以用于3D细胞培养、免疫系统紊乱、免疫学和毒理学研究，也是一种合适的转染宿主。

THP-1细胞培养注意事项

THP-1细胞悬浮圆形生长，偶有小聚团，属于正常现象，无需吹散；
圆形透亮、细胞膜完整的细胞是活细胞，如果无法判断，可以取少量细胞用台盼蓝染色后计数确定细胞活率；
少量细胞附着瓶底属于正常现象，可将悬浮细胞转移至新瓶，丢弃贴壁的细胞；
THP-1喜欢偏酸环境，培养基呈橘色时可不用换液，补充适量新鲜培养基维持一天再进行换液或传代操作；
THP-1有密度依赖性，密度低时生长较慢，培养密度维持在30万-100万细胞/mL之间为宜，超过80万细胞/mL即可传代；
THP-1复苏后恢复较慢，如无特殊情况，复苏后48小时内不对细胞进行操作；
THP-1生长需要稳定的环境，不频繁拿出培养箱，不频繁离心；
培养时瓶子竖立放置（瓶盖朝上），可增加细胞局部密度，促进细胞增殖。
β-巯基乙醇可以消除活性氧自由基，维持细胞高密度生长。若培养基中不添加β-巯基乙醇，长期培养细胞可能会出现大量贴壁，严重聚团等情况。

THP-1 细胞换液方法

离心换液法：

1. 准备所需的培养基、离心管以及无菌枪头等；（培养基提前预热）

2. 将所有细胞悬液转移至离心管中；

3. 900-1000rpm，3min离心；

4. 弃上清，加5mL PBS轻轻重悬细胞进行润洗，再900-1000rpm，3min离心；

Tips：此处PBS润洗是为了去除细胞碎片，平时培养若细胞碎片不多可以忽略此步骤，若碎片偏多，可以重复润洗2次。

5. 培养瓶中加入适量新鲜培养基；

6. 离心完成后弃上清，加适量新鲜培养基轻轻重悬细胞沉淀，将细胞悬液接种回培养瓶中，混匀细胞，放入培养箱中继续培养。

半换液法：

1. 准备所需的培养基、离心管以及无菌枪头等；（培养基提前预热）

2. 将培养瓶竖立静置一段时间，待细胞沉底；（肉眼观察细胞沉底情况）

3. 小心吸出一半的培养基，转移到离心管；

4. 900-1000rpm 3min离心，离心管里若有细胞，则用新鲜培养基重悬后放回原瓶；

5. 原瓶补充一半的新鲜培养基。

Tips：半换液2-3次后需要进行离心换液。

THP-1 细胞传代方法

离心法：

1. 取少量细胞悬液进行计数确定细胞密度，密度80万/mL以上传代，并根据计数结果确定传代比例；

2. 准备所需的培养基、离心管以及无菌枪头等；（培养基提前预热）

3. 用移液器吸取培养瓶内细胞悬液转移至离心管中；

4. 900-1000rpm，3min离心收集细胞；

5. 在培养瓶中加入适量新鲜培养基；（T25推荐10mL，T75推荐15mL）

6. 离心完成后，弃离心管内上清，然后加入适量新鲜培养基，轻轻重悬吹散细胞，将细胞悬液均匀接种至培养瓶中，轻轻混匀后将细胞放入培养箱中继续培养。

Tips：悬浮细胞通常都偏脆弱，注意控制吹打力度尽可能轻柔和离心转速以及时间不要过高，避免细胞受机械损伤。

直接分瓶法：

1. 取少量细胞悬液进行计数确定细胞密度，密度80w/mL以上传代，并根据计数结果确定传代比例；

2. 轻轻摇晃培养瓶，使细胞均匀分散；

3. 用移液器吸取培养瓶内细胞悬液，均分到若干个新培养瓶中，每瓶再补充适量的新鲜培养基，轻轻混匀后将细胞放入培养箱中继续培养。

Tips：用直接分瓶法传代1-2次后需进行离心传代。

THP-1 细胞冻存方法

1. 取少量细胞悬液进行计数确认细胞密度。

Tips：若冻存前培养基已经变黄，先换液静置培养4h左右，待细胞活力稳定后再进行冻存。

2. 准备所需的培养基、PBS、血清、DMSO、离心管以及无菌枪头等；（试剂需提前预热）

3. 根据收集到细胞量，配制相应量的冻存液，并准备相应数量的冻存管，在冻存管上标志细胞名称，代次，冻存时间等信息。推荐冻存液配方：90%FBS+10%DMSO；冻存密度200-300万细胞/mL/管。

Tips：冻存密度过低将导致复苏后状态不佳。

4. 将细胞悬液转移至离心管中1000rpm，3min离心收集细胞；

5. 离心完成后弃上清，加入相应量的配置好的冻存液轻轻重悬混匀细胞，将细胞悬液分装至冻存管中。注意吹打力度，不要产生过多气泡；

Tips：加入冻存液混匀细胞后及时分装并将细胞降温冻存，以减少DMSO对细胞的毒性。

6. 将细胞放置程序降温冻存盒中，再将冻存盒转移至-80℃冰箱进行降温冻存。

7. 次日复苏一管检查冻存效果，确认没问题后及时将冻存细胞放置液氮中保存，细胞在-80℃冰箱放置时间不要超过3天。

THP-1 细胞复苏方法

1. 提前将水浴锅预热至37℃，培养基复温至室温或37℃，离心机设置好转速；

2. 将冻存细胞从液氮或-80℃冰箱中取出，迅速置于37℃水浴，快速摇晃至完全融化，融化时间1min左右；

Tips：若液氮或冰箱距离细胞房较远，细胞需要放在干冰或冰盒上运送至细胞房。

3. 直接将冻存管900-1000rpm 2min离心，同时在培养瓶中加入适量新鲜培养基；

4. 离心完成后弃上清，吸取1mL新鲜培养基轻轻重悬细胞，吹散细胞后接种到培养瓶中；

5. 使用十字法或8字法将细胞混匀后置于培养箱中培养。

Tips：整个细胞复苏过程在尽可能5-10min内完成。

THP-1 细胞收货攻略

1. 拆封包装盒，确认细胞，说明书等是否齐全，收货细胞名与所购买细胞是否符合；
2. 观察细胞培养瓶是否完好，有无漏液，培养瓶内培养基是否有肉眼可见的絮状物或者浑浊等，发现异常及时拍照联系销售人员；
3. 确认无异常后，将培养瓶表面消毒，然后撕掉封口膜竖立放入培养箱平衡4h左右，让悬浮细胞沉下培养瓶底部；
4. 平衡过程中可以仔细阅读细胞说明书，知悉细胞所需培养体系，培养环境以及培养注意事项等；
5. 平衡完成后竖立取出细胞培养瓶，此时大部分细胞沉在培养瓶底部，小心吸取上清至离心管中，保留10mL左右培养基在培养瓶内，小心操作，尽量不要吸到沉在底部的细胞；
6. 将离心管1200rpm，5min离心收集未沉下培养瓶底部的细胞，上清可以4℃保存，后续用于培养细胞，以平稳过度到自己的培养基。将收集到的细胞接种至原培养瓶；
7. 轻轻混匀细胞，取100-200ul细胞悬液进行计数，根据计数结果调整细胞培养密度。然后置于培养箱中培养。