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脂质珠TM是为蛋白质下拉实验而设计的。可能的用途是在纯化蛋白溶液、细胞裂解物中测试脂质结合，或测试放射性标记的体外翻译产物的结合。 心磷脂珠由琼脂糖组成，每1ml珠含有10纳摩尔结合的心磷脂，足以进行多次蛋白质结合实验。 细胞裂解物/蛋白质的制备（过程可能因细胞类型/来源而异）： 这是使用细胞裂解物时的通用方法。应避免苛刻的裂解条件，因为它们可能会干扰脂质结构和结合。非离子清洁剂，如Igepal、NP40和Triton X-100，比离子清洁剂不那么苛刻，不变性，用于溶解和纯化膜蛋白复合物。 1、分离并离心细胞。 2、溶解颗粒。 3、涡旋和离心以制备澄清样品。 Cardiolipin琼脂糖珠（BGT-OPU-101）裂解缓冲液： 盐（10-20 mM HEPES，pH 7.4，100-150 mM NaCl） 非离子洗涤剂*（如0.1–2%Igepal） 二价阳离子（0-10 mM EDTA和/或EGTA） 蛋白酶抑制剂（完整的迷你蛋白酶片、原钒酸钠、氟化钠）
脂质珠™检测说明： 1. 脂质包被珠有1 mL和0.1 mL两种规格，以50%的浆液形式在1X PBS缓冲液中提供。 2. 订购1 mL脂质珠，附带200 µL的对照珠。对照珠也可单独购买，建议用于分析。 3. 储存于2-8°C。产品对温度和光线敏感，请勿冷冻。 4. 以1,000 x g或更低速度离心珠。不要高速离心珠，因为这可能会压碎珠。 5. 每1 mL珠中总共有10纳摩尔的结合脂质。 6. 珠的直径范围在45至165微米之间。 7. 每个蛋白使用50-100 µL的50%浆液脂质包被珠和对照珠。 脂质珠™ - 蛋白拉下协议： 1. 充分混合珠（不要涡旋）。将50-100 µL的50%珠浆液转移到0.5-1.5 mL的管中。 2. 以1,000 x g或更低速度离心珠以沉淀。小心移除上清液，避免丢失珠。 3. 用洗涤缓冲液的10倍过量洗涤珠。轻轻混合，孵育1-2分钟。重复洗涤步骤两次。 4. 小心移除洗涤上清液，并将珠在含有您的蛋白的结合缓冲液中重新悬浮。 a. 对于纯化的蛋白，使用1-10微克的蛋白，稀释在足够的结合缓冲液中形成50%脂质珠浆液。 b. 对于细胞裂解物、提取物、亚细胞分数：使用大约1毫克的总蛋白对1 mL结合缓冲液。将整个1 mL准备好的样品加入您洗涤过的珠中。 5. 孵育蛋白-珠溶液1-3小时。孵育可以在室温或4°C下进行，取决于您蛋白的稳定性。需要连续运动以保持珠悬浮。 6. 沉淀珠并小心移除上清液。如果需要，上清液可以用来监测未结合的蛋白。 7. 用洗涤缓冲液的10倍过量洗涤珠。轻轻混合，孵育1-2分钟。重复洗涤步骤五次。如果您选择在结合缓冲液中使用牛血清白蛋白（BSA），请确保在进入下一步之前将其彻底洗出。 8. 在最后一次洗涤后，通过向珠中加入等体积的2X Laemmli样品缓冲液（或类似物）并加热至70°C 10分钟来洗脱结合的蛋白。 9. 加热后，沉淀珠并移除上清液。将上清液储存在4°C下，直到分析。丢弃珠。 10. 蛋白可以通过SDS-PAGE分离，并通过凝胶的Coomassie蓝染色、蛋白转移和免疫印迹来检测感兴趣的蛋白，或进行自显影。 |
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