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在规律饮食周期的条件下，瘦素反映了脂肪组织的比例，显示出指数关系。这种构成性的瘦素合成被许多非激素和激素变量调节。在啮齿动物和人类中，刺激因素包括过度进食、胰岛素和糖皮质激素。已经显示了禁食、cAMP和β-3-肾上腺素能受体激动剂的抑制作用。从这些发现中可以清楚地看出，瘦素是各种代谢和内分泌反馈回路的一个组成部分。血清瘦素水平显示出适度的昼夜变化，夜间约凌晨2点左右达到峰值。此时的瘦素值比早晨或下午早些时候测量的水平高出约30至100%。这种变化，连同食物摄入的影响，需要在收集血样时考虑。这种ELISA试剂盒适用于测定人血清或血浆中的瘦素，以及其他生物流体（如唾液、尿液或母乳）和条件脂肪细胞培养介质中的瘦素，仅限于研究使用。 ALPCO-瘦素ELISA（超灵敏）：人血清、血浆、尿液、唾液和母乳中瘦素的测定。仅供研究使用。不用于诊断程序。 瘦素ELISA（超灵敏）（ALP-22-LEPHUU-E01）检测原理： 瘦素ELISA（超灵敏）是一种使用两种特异性和高亲和力抗体的夹心测定法。样品中的瘦素与包被在微量滴定板上的第一抗体结合。在接下来的步骤中，第二特异性抗瘦素抗体依次与固定的瘦素结合。第二种抗体被生物素化，并与链霉抗生物素蛋白-过氧化物酶结合物结合。在封闭底物反应中，颜色变化将根据样品中的瘦素水平定量催化。 样本： 这个试剂盒可以用于检测血清、血浆、尿液、唾液、母乳和脂肪细胞条件培养上清液中的瘦素。在相应的血清或EDTA血浆样本中，没有发现瘦素水平的显著偏差。如果使用市售的柠檬酸血浆管进行准备，样本将会被稀释，因此测得的瘦素值将会降低。用于血清制备的血液样本应按照标准化的静脉穿刺程序获得，必须避免溶血反应。如果营养状况正常，应在早晨或下午早些时候（下午2:00）收集人类血清和血浆样本。瘦素水平显示出昼夜变化，夜间约凌晨2:00达到峰值（37）。在收集血样时，需要考虑这种变化以及食物摄入的影响。所需的血清/血浆样本体积：25微升。血清/血浆样本的储存和稳定性：储存在紧闭的样本瓶中。在室温（20-25°C）下最多储存2天，在-20°C下至少储存2年。建议不超过五次冻融循环。在-20°C下储存样本2年以上对读数没有影响。应尽量减少样本的冷冻和解冻 - 5次冻融循环对样本没有影响。干扰：样本中的血红蛋白、甘油三酯和胆红素在1毫克/毫升、100毫克/毫升和100微克/毫升的浓度下不会干扰。然而，应由用户验证溶血、脂血或黄疸样本的使用。样本准备：样本必须用稀释缓冲液（DIL）稀释。对于血清和血浆样本，建议稀释比例为1:10。 典型校准曲线示例：
图1所示的标准曲线示例不能用于计算测试结果。每个研究实验室都必须为每次进行的测试建立一个标准曲线。 1:10稀释样本的瘦素浓度示例计算： - 稀释样本的测量信号为0.293 - 空白的测量信号为0.015 软件程序将根据标准曲线自动计算稀释样本的瘦素浓度。只需确定最合适的曲线拟合（这里：二次多项式）。 在这个示例案例中，程序通过解决以下方程来计算样本中的瘦素浓度： 0.278 = -0.0089658 + 0.64743x - 0.034025x^2 0.4524 = x 如果考虑到稀释因子（1:10），未稀释样本的瘦素浓度为： 0.4524 times 10 , text{ng/mL} = 4.4524 , text{ng/mL} 瘦素ELISA（超灵敏）文献参考： 1. Zhang Y, Proenca R, Maffei M, Barone M, Leopold L, Friedman JM. 1994 Positional cloning ofthe mouse obese gene and its human homologue. Nature. 372:425-432. 2. Halaas JL, Gajiwala KS, Maffei M, et al. 1995 Weight-reducing effects of the plasma proteinencoded by the obese gene. Science. 269:543-546. 3. MacDougald OA, Hwang CS, Fan H, Lane MD. 1995 Regulated expression of the obese geneproduct (leptin) in white adipose tissue and 3T3-L1 adipocytes. Proc Natl Acad Sci U S A. 92:9034-9037. 4. Rentsch J, Chiesi M. 1996 Regulation of ob gene mRNA levels in cultured adipocytes. FEBSLett. 379:55-59. |
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