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2009年秋天，家住蒙大拿州Billings市的Melinda Bachini因腹部不适、右肩疼痛，疲劳等就诊于当地医院，诊断为肝内胆管癌。就诊时，患者肝脏右侧可见一“葡萄柚”大小肿块，医院遂切除其2/3肝脏。接下来的2年里，患者经过了昂贵的药物治疗和化疗，但Melinda的症状却没有因此减轻，反而越来越严重：头发掉光、浑身疼痛、双肺和肝脏上布满了大大小小的肿瘤。
2012年4月，Melinda已经几乎无法走路，长期咳嗽让她精疲力尽，就在这个时候，她看到美国国家癌症研究所NCI外科主任、医学博士Steven A. Rosenberg发起了一项研究肿瘤浸润淋巴细胞疗法(TIL疗法)，它由联邦政府资助，所有医疗费用甚至包括路费都全免，那一刻，她决定去试一试。
Rosenberg博士先为Melinda进行手术，切除了右肺的几个肿瘤，然后从肿瘤组织中提取出浸润淋巴细胞，在实验室中培育扩增，这些经过扩增的淋巴细胞能够识别和攻击肿瘤细胞，从而引发免疫反应，抑制癌症的生长和扩散。 第一次，420亿个浸润淋巴细胞被注入Melinda的身体里，配合服用有助于激活T细胞的高剂量白细胞介素-2。注射后一周内Melinda的咳嗽就消失了，1个月后造影扫描甚至显示肺部和肝部所有肿瘤都在缩小！ 2013年10月，Melinda第二次注入了1,270亿个肿瘤浸润淋巴细胞，这让她的肿瘤又缩小了60%。一个月后，Melinda都能和家人一起滑雪了，生活开始变得美好，病情也变得稳定，“我几乎可以做任何我想做的事”。 几年后Melinda接受检查点抑制剂pembrolizumab治疗，继续成功缩小肿瘤，最终她身体的任何部位都没有活动肿瘤的迹象了！ 今年已经是第15年，她成功战胜了癌症。为了回馈癌症社区，她还成为了胆管癌基金会的患者代言人。
2024年2月16日，Iovance Biotherapeutics宣布，美国食品药品监督管理局（FDA）批准该公司的肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）疗法Amtagvi（lifileucel），用于治疗晚期黑色素瘤。lifileucel是首款获批的TIL疗法，也是首款获批治疗实体瘤的T细胞疗法。
2024年9月8日，商务部、国家卫生健康委和国家药监局三部门联合发布了《关于在医疗领域开展扩大开放试点工作的通知》。这一政策的核心内容是，国家将大幅放宽对干细胞行业的外商限制。而这一决定迅速引起了干细胞行业及医疗系统的广泛关注。自通知发布以来，新华社、中央电视台、新闻联播、中国政府网等国家级媒体纷纷进行了权威报道。中央电视台的新闻节目、新华社的专题报道，以及中国新闻社的深度解读，都对这一政策给予了高度关注。
目前肿瘤常用的治疗手段包括手术、放疗、化疗、靶向治疗、免疫治疗、介入治疗、细胞和基因治疗及中医中药治疗等。其中，细胞和基因治疗作为新型疗法兴起，为肿瘤治疗提供了革命性的解决方案，成为目前药物研发的热点。 广义的细胞和基因治疗（Cell and Gene Therapy，CGT）包括细胞治疗和基因治疗两部分内容。细胞治疗是指应用人自体或异体来源的细胞经体外操作后输入（或植入） 人体， 用于疾病治疗的过程。体外操作包括但不限于分离、纯化、 培养、 扩增、 活化、 细胞（系） 的建立、 冻存复苏等。主要可分为免疫细胞治疗、干细胞治疗和其它体细胞治疗。基因治疗是指通过基因添加，基因修正， 基因沉默等方式修饰个体基因的表达或修复异常基因， 达到治愈疾病目的的疗法。主要可分为以病毒为载体的基因替代和非病毒载体的基因编辑。 根据作用类型的不同， CGT 分主要为两大类：体内治疗和体外治疗：体外治疗：借助整合型病毒载体（如慢病毒载体）在体外条件下将基因导入前体细胞或干细胞基因组，伴随细胞分裂将基因传递至子代细胞，再将细胞回输至体内。体外治疗的代表为细胞疗法。
截止到2023年11月10日，共入组14名多线治疗失败的实体瘤患者入组（中位年龄49.0岁，92.9%的患者为女性），包含多种实体瘤，如小细胞肺癌、黑色素瘤和宫颈癌。患者入组后，研究医生选择合适的方案获取肿瘤组织以制备GT101（生产制备以及后续的质检约30天完成）。患者接受清淋化疗（环磷酰胺+氟达拉滨）后，回输GT101，剂量为≥5×109 个细胞，并输注IL-2(600,000IU/kg/剂，最多6次)。 结果显示：4例(28.6%)患者的最佳缓解为经确证的部分缓解(PR)，1例(7.1%)患者的最佳缓解为完全缓解(CR)，8例(57.1%)患者的最佳缓解为疾病稳定(SD)；1例患者为未确证的疾病进展(PD)。值得注意的是，在11/14例宫颈癌患者中，客观缓解率(ORR)为45.5%(5/11)，4例(36.4%)患者达到PR, 1例(9.1%)患者达到CR, 10/11例(90.9%)患者疾病得到控制，该队列的中位无进展生存期(PFS)为4.2个月。CR患者接受了长期随访，CR和PFS的持续时间(Kaplan-Meier估计)分别为24周和36周。 注射GT101后，所有患者外周血中的T细胞均扩增良好，中位达峰时间为6.83天，平均为15.9天。
大会报道的是一项单中心、研究者发起的开放标签单臂I期临床试验，在2021年9月-2024年1月期间，共入组20例复发卵巢癌患者，患者既往接受过中位2.5线（范围1～9）的化疗方案。其中，有10例（55.6%）患者接受PARP抑制剂，和2例（11.1%）患者接受免疫检查点抑制剂。患者在入组后，首先，接受肿瘤组织切除并运送到GMP，进行为期22-26天的制备；其次，将冷冻保存的输注产品运回临床中心；最后，所有患者均接受3天的淋巴细胞清除预处理、一次性输注PD-1单抗、GC203 TIL细胞。
GC203的采集制备及治疗过程 结果显示：通过中位随访时间为8.7个月（范围为2.9-18.8个月），研究者评估的确认ORR为33.3%（95% CI：16.3-56.3%），其中2例（11.1%）患者完全缓解（CR），4例（22.2%）患者部分缓解（PR），DCR为83.3%（95% CI：60.8-94.2%）。  中位PFS为5.5个月（范围为1.0- 14.1个月）；中位OS未达到，6个月和12个月OS率分别为75.6%（95% CI：57.4-99.6%）和68.8%（95% CI：49.3-95.9%）。
GC 203 TIL治疗卵巢癌的PFS和OS数据 安全性方面：最常见的不良事件为C反应蛋白水平升高（33%）、发热（33%）和疲劳（11%）。仅有1名患者出现3级不良事件（中性粒细胞减少症），未发生5级不良事件。大多数不良事件为1级或2级，可通过对症治疗缓解或治愈。 2024年5月29日，作为全球首款非病毒载体基因修饰TIL疗法GC203的I期临床试验(KUNLUN-01)启动会在复旦大学附属肿瘤医院顺利召开，这是国内第一个正式启动注册临床的基因修饰TIL疗法。2024年6月，该疗法也得到了官方媒体《解放日报》的报道，相关链接：官媒“解放日报”报道颠覆性肿瘤新疗法让国外近400万一针治愈肿瘤变成平民价
（4）Lifileucel CR率突破30%
尽管免疫检查点抑制剂（ICI）作为一线标准治疗已取得显著进展，但仍有许多数患者未能获得长期缓解。自体肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）疗法Lifileucel已获美国FDA批准用于免疫治疗进展后的选择，与PD-1单抗联合的一线治疗提供了一种新的治疗方向。 IOV-COM-202临床试验（NCT03645928）队列1A评估了Lifileucel联合 pembrolizumab 一线治疗晚期黑色素瘤的疗效和安全性。入组未接受过免疫治疗的晚期黑色素瘤，但允许患者前线接受过BRAF抑制剂的治疗。入组的患者接受手术切取组织样本进行TILs的生产。治疗方案包括pembro、非清髓性淋巴细胞清除（环磷酰胺和氟达拉滨）、单次lifileucel输注以及IL-2注射，在疾病未进展或毒性可接受的情况下继续使用pembro不超过24个月。研究终点是客观缓解率（ORR）和治疗期间不良事件（TEAE）发生率。 结果显示：截至2023年12月22日，共有23例患者接受了联合治疗方案。患者基线特征：7例（31.8%）患者有肝脏病灶；入组时的转移分期包括：2例（8.7%）为M0，6例（26.1%）为M1a，14例（60.9%）为M1b-M1d，1例未知；8例（34.8%）患者有BRAF V600突变；3例（13.0%）患者既往接受过BRAF/MEK抑制剂治疗。 ORR为65.2%，包括30.4%的完全缓解（CR）和34.8%的部分缓解（PR）。此外，26.1%的患者疾病稳定（SD）。所有可评估的患者均显示出靶病灶缩小，且治疗反应随着时间的推移而加深，66.7%的患者持续缓解，8例患者的缓解时间至少为12个月。
安全性方面：Lifileucel联合用药的安全性与已知的治疗毒性特征一致。治疗中最常见的TEAE包括寒战、发热、恶心和呕吐。最常见的3级或4级TEAE是发热性中性粒细胞减少症、高血压和发热。血液学异常与淋巴细胞耗竭有关，一些流感样症状与白细胞介素-2的给药有关，往往不会持续。 除此上述研究以外，TIL细胞疗法在其他方面的进展。 2024年2月16日，Iovance Biotherapeutics宣布，美国食品药品监督管理局（FDA）批准该公司的肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）疗法Amtagvi（lifileucel），用于治疗晚期黑色素瘤。lifileucel是首款获批的TIL疗法，也是首款获批治疗实体瘤的T细胞疗法。
C-144-01是一项Ⅱ期临床试验，旨在评估Lifileucel（LN-144）在经抗 PD-1治疗和BRAFi±MEKi治疗后进展的晚期黑色素瘤患者的疗效和安全性。研究纳入了66例既往免疫（100%接受过PD-1单抗治疗，80%接受过CTLA-4单抗治疗）、靶向（23%）多线治疗后进展的晚期黑色素瘤患者，44%患者有肝或脑转移，平均靶病灶直径总和106mm，40.9%患者LDH水平升高。2021年ASCO年会上公布的数据显示，TIL治疗后客观缓解率（ORR）高达36.4%，其中2例达到完全缓解（CR），22例达到部分缓解（PR），疾病控制率（DCR）为80.3%，中位缓解持续时间（DOR）仍未达到。在黑色素瘤难治人群中取得了近40%的ORR，即使PD-L1阴性的患者也有响应，这给免疫耐药患者和难治患者带来了新的治疗希望。
临床试验患者治疗前后比较 2022年ESMO会议上，首个评估TIL疗法在实体瘤中疗效的Ⅲ期研究结果公布。该研究探索了TILs治疗比对Ipilimuamb（3mg/kg Q3W up to 4次），在晚期黑色素瘤中的疗效。入组标准为最多一线治疗失败之后，不能接受过免疫的治疗。
研究共入组168例患者，86%是PD-1经治的患者（20%为辅助治疗，60%为晚期治疗），20%左右的患者LDH升高，BRAF突变约40%。中位随访33个月。该研究的TILs成功率非常高，在细胞治疗组84名患者中，只有4名患者最后没有接受治疗，其中只有1名是由于无法培养足量的TILs回输。疗效方面，首要终点PFS阳性。TIL和IPI组中位PFS分别为7.2个月和3.1个月（HR 0.50，P<0.001）。次要终点，ORR分别为49%和21%，CR率为20%和7%，OS为25.8个月和18.9个月（P=0.39）。安全性方面，无论是在治疗前的清淋化疗时期，还是在TILs IL2治疗期间，3级以上的毒性都要接近100%。相比而言，IPI组的3级毒性为57%，但未发生治疗相关的死亡。
该Ⅲ期研究，证实了TILs的治疗较IPI在晚期黑色素瘤后线治疗，特别是PD-1治疗失败后的，具有更佳的疗效。从这项研究的阳性结果来看，TILs有望成为晚期黑色素瘤二线治疗的选择，从有效率和PFS时间来看，TILs治疗也明显优于目前的其它二线选择，包括PD-1联合IPI治疗、IPI单药、或者PD-1联合抗血管TKI治疗。但存在问题还是TILs技术本身在临床上的可及性、不同中心开展该技术的规范性和一致性、以及TILs治疗的安全性。作为晚期的后线治疗选择，如何优化和统一细胞治疗的技术，保证成功率和安全性，是TILs未来在真实临床大面积推广的保证。 在其他实体瘤领域TIL的表现也十分惊艳（经典案例） 在2016年发表的文献中，一名转移性结直肠癌患者接受了靶向KRAS G12D突变的TIL治疗后，患者肺部的7个转移灶中有6个明显缩小，其中3个完全消失。患者在4年后仍然没有疾病进展。
肺癌是全球发病和死亡最高的癌症，尽管近年来靶向和免疫治疗发展已经让肺癌越来越趋于慢性病的治疗，但是对于一些患者来说，当最后的保底药物PD-1发生耐药后，仍让患者们感到恐慌。 该试验共有32名患者参加，最终有16名患者接受TILS治疗，其中12名患者可以评估。在平均随访1.4年时，3名患者病情缓解，其中两名完全患者，并且已超过一年。另一名患者的缓解即将得到确认。
一项LN-145用于晚期宫颈癌的II期临床试验，数据最亮眼。这项临床试验入组的大多为二至三种治疗失败的晚期宫颈癌患者，属于难治性病例，一共27名患者疗效可评价。结果显示：中位随访时间3.5个月时，LN-145治疗的客观缓解率（ORR）为44%，疾病控制率（DCR）为85%，其中3名患者肿瘤完全消失，9名患者肿瘤明显缩小。
2018年《自然医学》（Nature Medicine）杂志上发表了一名难治性激素阳性转移性乳腺癌患者接受了4种突变蛋白（SLC3A2，KIAA0368，CADPS2和CTSB）的TILs，治疗22个月后，患者肿瘤完全消失，且4年后仍未出现进展或复发的典型案例。
TIL细胞治疗与其他疗法的联合应用在实体瘤方面也取得一些进展。 ① TIL与ICI联合：免疫检查点受体(如CTLA-4和PD-1/PD-L1) 表达于T细胞表面，是免疫系统自我保护机制。肿瘤患者中，效应T细胞上CTLA-4和PD-1分子被上调，并分别与抗原呈递细胞或瘤细胞的B7-1/B7-2和PD-L1结合，从而导致T细胞功能受抑。此外，T细胞长期接触肿瘤抗原后，CD8+ T细胞会出现凋亡或进入异常分化状态，抑制性受体会高表达，使CD8+ T细胞对特异性肿瘤抗原几乎无应，此时可用检查点抑制剂改善CD8+ T细胞活性。因此，为增加TIL肿瘤反应性，可在TIL初始培养阶段及在TIL输注后联合ICI治疗。 ② TIL与BRAF抑制剂联合：BRAF基因在细胞生长和分化中起重要作用。大部分肿瘤患者会发生BRAF突变，激活的BRAF突变(主要是V600E)可诱导免疫逃逸，使机体免疫“迟钝”，并获得逃避T细胞免疫反应的能力。BRAF抑制剂威罗非尼可降低相关免疫抑制信号，减少免疫抑制细胞，增强黑色素瘤抗原表达，促进淋巴细胞浸润和特异性T细胞增殖。威罗非尼治疗BRAF (V600E) 突变黑色素瘤的ORR高达50%，改善无进展生存率和总生存率，但BRAF抑制剂的临床作用持续时间短。最近在一项临床试验显示，接受TIL、HD IL-2和威罗非尼联合治疗11名转移性黑色素瘤有7名出现有效应答，其中2名患者达完全缓解。 ③TIL与其他疗法的联合：树突状细胞(dendritic cell，DC) 是人体抗原递呈能力最强的细胞，DC治疗通过采用病人自体单核细胞在体外培养诱导生成DC，然后负载相应肿瘤抗原，制成负载肿瘤抗原的DC，再将这些DC注入体内刺激体内的肿瘤杀伤性淋巴细胞增殖，发挥长期肿瘤监视作用和肿瘤杀伤作用，达到控灭肿瘤的目的。DC疫苗可和TIL治疗联合，激活和增加TIL数量，目前DC与TIL联合治疗的临床试验正在进行。溶瘤病毒通过使TIL分泌细胞因子，从而提高TIL的控瘤作用，TIL疗法与溶瘤病毒联合治疗也正在探索。一项TIL疗法联合腺病毒治疗转移性黑色素瘤临床试验表明，13例患者有5例达到客观缓解，其中3例完全缓解。 总结：“TIL细胞成为实体肿瘤治疗领域临床研究的热点，从1988年Steven A. Rosenberg首次用TIL疗法对20例转移性黑色素瘤患者进行治疗，最终60%患者达到客观缓解。2011年，继之对转移性黑色素瘤的一项临床研究显示，在接受自体TIL回输和IL-2联合治疗后，93名患者有20名肿瘤完全缓解，而且其中19例在治疗后3 年依然保持肿瘤完全消退状态。除黑色素瘤外，TIL疗法在结直肠癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、转移性乳腺癌和转移性胆管癌中均展现出强大疗效。TIL细胞疗法为肿瘤患者带来了希望，并得到国家的重视，期待TIL细胞治疗，造福我们中国广大实体肿瘤患者。 TILs细胞疗法基本知识 （1）获得病人的肿瘤组织块，其中混杂着体积较大的肿瘤细胞以及体积小而圆的T淋巴细胞; （2）肿瘤样本被运送到专有的GMP设施，在那里TIL被分离并繁殖，将不同种类的T淋巴细胞在细胞板上克隆化，并加入高浓度的IL-2来选择培养，在三周内产生数十亿TIL。 (3)在IL-2的刺激下不同种类的T淋巴细胞都得到了克隆扩增，形成了细胞群; (4)用病人的肿瘤细胞和扩增后的T淋巴细胞反应，凡是能够发生杀瘤效应的T淋巴细胞群作为阳性TIL群留下，其余的丢弃; (5)用负载了肿瘤特异性抗原的树突状细胞(DC)进一步扩增培养肿瘤特异性的TIL; (6)患者开始一周的预处理治疗(清髓)以准备接受TIL。TIL产品作为一次性疗法使用，在TIL输注后立即接受多达6剂白细胞介素2(IL-2)，来支持患者体内TIL的生长和激活。
④TIL细胞与其他细胞的不同 （1）LAK、CD3AK、DC、CIK、NK等免疫细胞，均来自外周血，靶向性弱。 （2）TIL细胞来自于肿瘤组织内部，有60%以上能识别肿瘤细胞，有很强的靶向性。 （3）TIL细胞杀伤力高，比LAK强50-100倍。 (4)宿主处于免疫抑制状态，反而有利于增强TIL的杀伤作用，适合与放化疗联用。 (5)TIL细胞的扩增能力比LAK细胞强。 (6)采用定向筛选技术后，TIL的疗效显著增强，且通常只需要注射一次。 |
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