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前言 变形杆菌属细菌在临床中的分离率较高，有的情况考虑污染，有的情况我们微生物室工作人员视作致病菌向下处理，需要为临床提供鉴定和药敏结果。变形杆菌属细菌的感染有时为单一细菌感染，有时则伴有其他细菌的同时感染，这时分离其他致病菌就变成了难点。 案例经过 患者男性，85岁，因右小趾颜色变暗半年，局部流脓三天，门诊以右足感染收治入院，入院后取分泌物进行培养。 该患者分泌物经过24小时5%二氧化碳环境培养，血平板如下图。  可以看到整个平板上变形杆菌属细菌弥漫生长，变形杆菌属细菌的菌落生长到三区，考虑做鉴定药敏，同时可见革兰氏阳性球菌大量生长，需要对阳性球菌进行分纯处理。 此处我使用血平板分纯阳性球菌，三区划线，每一区烧接种环（或是更换新环），在二区与三区的交界处贴30μg的氨曲南药敏纸片，再次培养18~24小时，另一平板未贴氨曲南药敏纸片，作为时差法分离观察。当日下午笔者在观察时差法分离平板时，发现菌落非常小，肉眼根本无法鉴别出来（可能与接种时间短有关），无法做下一步处理。次日两个平板如下图所示：  贴氨曲南药敏纸片后，抑制了变形杆菌属细菌的迁徙生长，产生了较明显抑菌圈，圈内生长的即为我们要分离的目标细菌（红色箭头）。而时差法分离平板上三区可以见到单个生长的革兰氏阳性球菌的菌落，菌落较小，且被变形杆菌覆盖，无法实验。整个平板上依然有变形杆菌属细菌（绿色箭头）存在，也即并未完全分离出目标细菌。 结果 我实验室使用梅里埃VITEK 2 Compact全自动微生物分析系统，经鉴定，变形杆菌属细菌为普通变形杆菌，药敏结果如下图。仪器稀释法检测抗菌药物亚胺培南药敏时，由于方法学的局限性，当其结果呈现耐药或中介时存在判读过高的情况，因故我实验室使用手工K-B纸片扩散法对药敏结果予以纠正，以提高报告结果的准确性[1]。  取自贴氨曲南药敏纸片平板上分离出来的革兰氏阳性球菌上机，鉴定结果为金黄色葡萄球菌，鉴定率为极好的鉴定，药敏结果如下图。  总结 变形杆菌属细菌大多数菌株在血琼脂平板和中国蓝平板上可蔓延呈薄膜状或波纹状生长，在木糖-赖氨酸-脱氧胆酸（XLD）培养基上呈现中等大小、黄色、中心有黑色或无黑色菌落，在含胆盐的培养基如麦康凯平板和SS平板上则无此现象，菌落呈圆形，较扁平，无色半透明，与沙门菌属和志贺菌属的菌落相似。在SS平板上菌落因产硫化氢而呈现黑色中心，与沙门菌属类似。菌落涂片为革兰氏阴性杆菌，有明显的多形性[2-3]。 该菌属是引起泌尿生殖道感染的主要病原菌，还可以引起菌血症、伤口、呼吸道等多种感染。奇异变形杆菌也是婴儿肠炎的病原菌之一。变形杆菌属、摩根菌属和普罗威登菌属临床分离菌株近年有明显增加趋势；这些菌株中碳青霉烯类耐药菌株的检出亦有明显增多。应加强关注[4]。 临床上当变形杆菌属细菌与其他细菌一并成为致病菌，其他细菌的分离就变成了我们不可忽视的工作。笔者亲身试验过三种方法可以成功分离，当然具体情况还要看长得是什么菌。 革兰氏阳性球菌 ：笔者目标细菌为金黄色葡萄菌，三区划线，每一区烧接种环（或是更换新环），在二区与三区的交界处贴30μg的氨曲南纸片，再次培养18~24小时。氨曲南可以抑制变形杆菌属细菌的迁徙生长，产生抑菌圈，圈内生长的即为我们要分离的目标细菌。 革兰氏阴性杆菌 ：笔者目标细菌为克雷伯菌属细菌，采用SS平板，三区划线，每一区烧接种环（或是更换新环），再次培养18~24小时。变形杆菌属细菌在SS平板上菌落因产硫化氢而呈现黑色中心，且菌落较扁平，可以与克雷伯菌属细菌较好的区分开来，如下图。另外，其他不产硫化氢的肠杆菌科细菌也可以根据菌落中心的黑色与之区分开来。有趣的是，克雷伯菌属产生的菌落通常较大，使用接种环轻轻拨开菌落表面，取菌落中间一层用中国蓝平板分纯，成功分纯几率也较大。  时间差分离法 ：这个方法可以说是与变形杆菌属细菌进行赛跑。可以分离阳性球菌或阴性杆菌，阳性球菌使用血琼脂平板，阴性杆菌可以使用中国蓝琼脂平板，三区划线，每一区烧接种环（或是更换新环），培养期间每隔一段时间观察一次，直到肉眼可以辨认出目标细菌，且在变形杆菌属细菌并未产生明显的波纹覆盖目标细菌时，取菌再次分纯增菌，培养18~24小时。但是此法需要实验室操作人员具有较好的辨认细菌菌落特征的功底，才能在菌落较小的时候准确进行分离。 微生物室的工作每天充满着未知与挑战，看似枯燥的工作实则是一场场头脑风暴，与变形杆菌属细菌的战斗只是其中的一小部分，这就需要我们检验人不断学习，学海无涯，再接再厉。 参考文献： [1]伍萃欣,廖志玲,黄顺娇,吴洁英.变形杆菌属中抗菌药物亚胺培南稀释法和纸片法的对比研究[J].系统医学,2023,8(19):28-31. [2]王建中.临床检验诊断学图谱[M].北京:人民卫生出版社,2020，881-882. [3]何迎峰,邹云眉,朱惠芳,黄巧萍,李春毅.从变形杆菌蔓延生长中分离气单胞菌的方法探讨[J].中国卫生检验杂志,2019,29(01):39-40. [4]许云敏,董小雪,单斌,等.2015—2021年CHINET临床分离变形杆菌属、摩根菌属和普罗威登菌属细菌耐药性变迁[J].中国感染与化疗杂志,2024,24(04):410-417. 作者：吕昕（秦皇岛市工人医院） |
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