【原】海星生物|干细胞(MSCs)分离方法

目前常用的干细胞分离方法主要有：组织贴壁法、差速离心法、流式分选法、磁珠分选法。

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 组织贴壁法

根据MSCs具有在塑料或玻璃培养皿中贴壁生长的特性对其进行分离。

例如：脐带间充质干细胞的分离提取

(1) 无菌取剖宫产新鲜脐带约10 cm，生理盐水洗去脐带残留血液，剪成2～3cm 的小段，再次漂洗，纵行剖开脐带，剔除1 条脐静脉、两条脐动脉，剥离华通胶。 (2) 用眼科剪将华通胶剪碎成1mm²的小组织块，转移至细胞培养瓶中，加入含有体积分数为10%FBS、100 U/mL青霉素、100mg/L链霉素的DMEM/F12培养液，于5%CO2、37℃的培养箱中静置培养。 (3) 倒置显微镜每天观察细胞生长情况。 (4) 1周后首次换液，此后3～4d 换液1次。 (5) 待细胞长至80%～90%融合时用胰蛋白酶/EDTA消化液消化传代，显微镜下控制消化时间。

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差速离心法

主要是采取逐渐提高离心速度的方法分离不同大小的细胞器。起始的离心速度较低，让较大的颗粒沉降到管底，小的颗粒仍然悬浮在上清液中。收集沉淀，改用较高的离心速度离心悬浮液，将较小的颗粒沉降，以此类推，达到分离不同大小颗粒的目的。

不同颗粒之间存在沉降系数差时，  在一定离心力作用下，颗粒各自以一定速度沉降，在密度梯度不同区域上形成区带的方法。

适用于人，猴子，犬等物种骨髓间充质干细胞的提取

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 流式分选法

流式细胞仪分离法原理是：当经荧光染色或标记的单细胞悬液放入样品管中，被高压压入流动室内。流动室内充满鞘液，在鞘液的包裹和推动下，细胞被排成单列，以一定速度从流动室喷口喷出。在流动室的喷口上配有一个超高频的压电晶体，充电后振动，使喷出的液流断裂为均匀的液滴，待测细胞就分散在这些液滴之中。将这些液滴充以正、负不同的电荷，当液滴流经过带有几千伏的偏转板时，在高压电场的作用下偏转，落入各自的收集容器中，没有充电的液滴落入中间的废液容器，从而实现细胞的分离。

FACS（fluorescence-activated cell sorting）利用荧光素标记不同的分子，通过调节合适的电压、补偿等，通过荧光将目的细胞与非目的细胞区分开来。

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 磁珠分选法

免疫磁珠分选法分离细胞是基于细胞表面抗原能与连接有磁珠的特异性单抗相结合的原理。在外加磁场中，通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中，无该种表面抗原的细胞由于不能与连接着磁珠的特异性单抗结合而没有磁性，不在磁场中停留，从而使细胞得以分离。

免疫磁珠分选法分为正选法和负选法。在正选法中，磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞；而在负选法中，磁珠结合不需要的细胞，游离于上清液的细胞即为所需目的细胞。

不同方法的优缺点‌

‌组织贴壁法‌：操作简单，适用于脐带等组织，但需要较长时间培养。

‌差速离心法‌：适用于大量细胞的分离，但操作复杂且对细胞活性有一定影响。

‌流式分选法‌：分离效率高，适用于高纯度细胞的分离，但设备昂贵且操作复杂。

‌磁珠分选法‌：操作简便，适用于多种细胞的分离，但对设备要求较高‌