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H.幽门螺杆菌SlyD通过上调TPT1蛋白水平诱导GIM标志物的表达在这项研究中，作者使用了H。pylori 26695和ΔSlyD菌株刺激人胃上皮细胞，以检查它们对TPT 1和GIM标志物（特别是CDX 2、Villin和MUC 2）表达的影响。RT-qPCR分析显示感染H. pylori 26695和用ΔSlyD菌株感染的那些（图1A）。然而，在感染H. pylori 26695（图1 B）。此外，TPT 1蛋白水平的增加与GIM标志物表达的伴随升高相关（图1C和D）。此外，作者用200 ng/ml纯化的HpSlyD蛋白刺激胃上皮细胞。与上述结果一致，HpSlyD刺激后TPT 1 mRNA水平保持不变（图1E）。然而，作者观察到用纯化的HpSlyD蛋白刺激后TPT 1蛋白水平的显著增加（图1F）。除了TPT 1蛋白的上调之外，作者还检测到用纯化的HpSlyD蛋白处理后GIM标志物CDX 2、Villin和MUC 2的表达增加（图1G和H）。总的来说，作者的研究结果表明，虽然H。幽门螺杆菌SlyD不直接影响TPT 1 mRNA的表达，但在提高TPT 1蛋白水平方面起重要作用。TPT 1蛋白的上调与GIM标志物表达的增加有关，表明H. Pylori SlyD通过靶向TPT 1的转录后机制影响胃上皮细胞的化生转化。H.幽门螺杆菌SlyD通过hnRNPK上调TPT1蛋白表达进一步探讨H. pylori SlyD对TPT 1蛋白表达的调控作用; pylori 26695和ΔSlyD菌株进行RNA-seq分析。两种菌株之间的比较揭示了H. pylori 26695。GO分析揭示了H. pylori SlyD在生物学过程中的作用，如组蛋白修饰、核膜和细胞-基质连接。此外，KEGG富集分析强调了H. pylori SlyD在途径如人乳头瘤病毒感染、内吞作用、肌动蛋白细胞骨架调节和其他信号传导途径中的作用。为了缩小参与TPT 1转录后调控的候选者，作者用先前在HpSlyD-GFP稳定细胞系中进行的质谱分析中鉴定的差异表达蛋白质对RNA-seq数据进行了验证[45]。通过整合的方法，hnRNPK被确定为H.幽门螺杆菌SlyD驱动的TPT 1调节（图2A）。HnRNPK是一种众所周知的RNA结合蛋白，参与转录后水平的基因表达调控，影响mRNA稳定性和翻译效率[27，46，47]。随后的验证实验证实，hnRNPK在感染H. pylori 26695，与ΔSlyD菌株和空白组相比（图2 B和C）。为了进一步探讨hnRNPK在TPT 1调控中的功能作用，作者在H. pylori 26695感染的胃上皮细胞。有趣的是，虽然在hnRNPK敲低后TPT1 mRNA水平基本保持不变，但TPT1蛋白水平显著降低（图2D和E）。除了对TPT 1蛋白表达的影响之外，hnRNPK敲低还导致GIM标志物CDX 2、绒毛蛋白和MUC 2的表达显著降低（图2F和G）。这些结果表明H. pylori SlyD上调hnRNPK表达，这反过来又提高TPT1蛋白水平而不影响TPT1 mRNA转录，从而促进GIM的进展。H. pylori SlyD通过促进hnRNPK和TPT1之间的相互作用增强TPT1蛋白的稳定性为了进一步了解hnRNPK影响TPT 1蛋白表达的调控机制，作者进行了Co-IP测定，以评估胃上皮细胞中hnRNPK和TPT 1之间的相互作用。作者的结果揭示了hnRNPK和TPT 1之间的直接相互作用（图3A）。值得注意的是，这种相互作用在感染H. pylori 26695菌株与ΔSlyD菌株相比，表明H. pylori SlyD促进hnRNPK-TPT 1相互作用。此外，为了探索hnRNPK-TPT 1相互作用的功能结果，作者接下来检查了hnRNPK对TPT 1蛋白稳定性的影响。这些测定在hnRNPK敲低后在两种胃上皮细胞系中进行。结果表明，在CHX诱导的新生蛋白质合成减少的条件下，减少的hnRNPK表达显著缩短了TPT 1的半衰期并加速其降解（图3B和C）。这些结果共同表明，H。pylori SlyD促进hnRNPK与TPT 1的相互作用，从而增加TPT 1蛋白在胃上皮细胞中的稳定性。为了研究TPT1表达升高如何导致GIM驱动因子CDX2的激活，作者利用UCSC基因组浏览器来预测可能与CDX2启动子结合的转录因子。在预测的候选者中，POU结构域转录因子家族的成员与CDX2密切相关。接下来，作者利用GEPIA 2.0数据库来探索胃组织中TPT1、CDX2和特定POU结构域家族成员之间的相关性。作者的分析显示，POU家族成员OCT 1和POU6F2（RPF 1）均与TPT 1和CDX 2表达呈正相关。重要的是，OCT 1与TPT 1和CDX 2的相关性比POU6F2更强（图4A）。然后作者检测了感染H. pylori 26695或ΔSlyD。结果表明，H. 与ΔSlyD菌株和空白组相比，pylori 26695显著上调OCT 1表达（图4 B）。为了进一步建立TPT 1、OCT 1和GIM标志物之间的关系，作者在GES-1和AGS细胞系中进行了TPT 1过表达实验，发现TPT 1的过表达导致OCT 1水平的显著增加，以及GIM标志物的上调（图4C-F）。另外，过表达的OCT 1能够挽救由TPT 1敲低引起的GIM标志物表达的降低（图4G和H）。这种拯救作用突出了OCT 1在介导TPT 1驱动的GIM标志物表达中的关键作用。总之，这些结果表明TPT 1通过OCT 1促进GIM标记，而H. pylori SlyD在该途径中起关键调节剂的作用。为了阐明OCT 1和CDX 2之间的转录调节机制，作者采用JASPAR数据库来预测OCT 1在CDX 2启动子区域内的潜在结合位点（图5A）。总共鉴定了三个潜在的结合位点（图5B）。然后用含有CDX 2启动子区或其三个突变体的构建体转染HEK 293细胞，然后过表达OCT 1，进行双荧光素酶报告基因测定。结果表明，与阴性对照组相比，当OCT 1过表达时，CDX 2启动子处的荧光素酶活性显著增加。然而，三个结合位点中的每一个中的突变导致荧光素酶活性的显著降低（图5C）。接下来，作者进行了ChIP-qPCR以进一步证实OCT 1与CDX 2启动子的体外直接结合（图5D）。这些发现共同表明，OCT 1作为CDX2的转录调节因子，有助于上调CDX2的表达。DHA靶向TPT1抑制H.幽门螺杆菌SlyD诱导的GIM标志物表达基于作者的研究结果强调TPT1在H. pylori SlyD诱导的GIM标志物表达，作者试图探索潜在的临床药物靶向TPT1抑制H.幽门螺杆菌SlyD诱导的GIM。以前的报告已经确定盐酸布克利嗪[48]、舍曲林[49]和DHA [50]可能是TPT 1的抑制剂。通过分子对接分析，发现所有三种化合物都与TPT 1结合（鉴定了分子和分子间的相互作用）。|亲和力|> 5）。值得注意的是，DHA和TPT 1之间的结合自由能最高，表明存在强相互作用（图6A和B）。随后，向胃上皮细胞补充DHA，然后用纯化的HpSlyD蛋白共刺激，显示TPT 1水平的显著抑制，伴随着GIM标志物表达的下调（图6C和D）。这些结果表明，DHA，作为一种TPT1靶向化合物，有希望作为一个潜在的抑制剂H。pylori相关的GIM标志物表达。H.幽门螺杆菌SlyD与人胃粘膜GIM中hnRNPK/TPT 1/OCT 1/CDX 2表达相关对18例GS和52例GIM组织进行hnRNPK、TPT 1、OCT 1和CDX 2的IHC染色。两组之间的性别和年龄无统计学差异。与GS样品相比，HnRNPK、TPT 1、OCT 1和CDX 2在GIM中显示出更高的表达（图7A和B）。H.幽门螺杆菌阳性患者显示hnRNPK、TPT 1、OCT 1和CDX 2的蛋白水平升高（图7 C）。在H. pylori阳性患者中，进一步分层为HpslyD阴性和HpslyD阳性组揭示了HpslyD阳性组中hnRNPK、TPT 1、OCT 1和CDX 2的蛋白表达增加（图7 D）。然后，作者研究了在不同的H. pylori亚组。结果表明，在H. pylori阳性组和HpslyD阳性组，与H. pylori阴性和HpslyD阴性组（图7 E）。值得注意的是，无论H.幽门螺杆菌感染状况。这些发现表明H。pylori SlyD和hnRNPK/TPT 1/OCT 1/CDX 2在人胃粘膜GIM中的表达，突出了这些分子在H.幽门感染H.幽门螺杆菌SlyD与MG胃粘膜GIM中hnRNPK/TPT 1/OCT 1/CDX 2的表达有关MGs口服给药，不同的H。pylori菌株或生理盐水，并在73周后收集它们的胃组织。值得注意的是，在感染菌株2的小鼠的胃粘膜中显著的炎症反应是明显的，伴随着GIM腺的存在（图8A）。与空白组和菌株1组相比，菌株2感染组的IHC染色显示胃粘膜中hnRNPK、TPT 1、OCT 1和CDX 2的表达增加（图8A）。这些结果表明，H. pylori SlyD在小鼠中诱导炎症和GIM，可能与hnRNPK、TPT 1、OCT 1和CDX 2的表达增加有关。总结 H. pylori SlyD通过hnRNPK上调TPT 1并诱导GIM标志物的表达。hnRNPK与TPT 1的相互作用增强了TPT 1蛋白的稳定性，H. pylori SlyD增强了这种关联。TPT 1通过OCT 1促进GIM标记物的表达，OCT 1结合CDX 2启动子区域，从而调节其转录活性。双氢青蒿素具有靶向TPT 1的潜力，抑制H.幽门螺杆菌SlyD诱导的GIM标志物表达。
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